湖南中医药大学中医学院等揭示附虎利节汤多靶点治疗类风湿关节炎的作用机制

【写在前面】：本期推荐的是由湖南中医药大学中医学院和第一医院风湿科合作近期发表于Phytomedicine(IF8.3）的一篇文章，揭示附虎利节汤通过从自身抗原形成到骨破坏的多靶点治疗类风湿关节炎。

【期刊简介】

【题目及作者信息】

Fuhu Lijie Tang treats rheumatoid arthritis through multitarget therapy from autoantigen formation to bone destruction

背景：类风湿性关节炎（RA）是一种无法治愈的、致残的自身免疫性疾病，与针对不同病理机制的改善疾病的抗风湿药物联合治疗是改善治疗结果的一种治疗策略。中药为RA提供了多成分、多靶点治疗的优势，但其同时靶向RA多个关键病理机制的能力仍有待进一步研究。FHLJT是一种对RA有潜在治疗作用的新型中药制剂，其抗关节炎机制有待系统研究。

目的：本研究旨在全面研究FHLJT的抗关节炎作用及其潜在分子机制，重点关注其在治疗RA中同时靶向多种关键病理机制的潜力。

方法：II型胶原蛋白诱导的关节炎（CIA）大鼠接受FHLJT治疗，通过关节炎评分、爪子肿胀测量、炎症标志物分析和组织病理学评估治疗效果。滑液组织转录组学鉴定了差异表达的基因，然后通过蛋白质杂交、免疫组织化学、酶联免疫分析和流式细胞术进行验证以验证这些发现。

结果：附虎利节汤显著减轻了CIA大鼠的关节炎症和组织病理学损伤。转录组分析显示，FHLJT下调了多个与RA相关的信号通路，包括RA信号通路、T细胞受体（TCR）、B细胞受体（BCR）、血管内皮生长因子、破骨细胞分化、抗原呈递、吞噬体和蛋白质修饰通路。进一步的相互作用分析确定了PI3K-Akt和AMPK信号通路在这些过程中起核心作用。实验验证证实，FHLJT抑制了CIA大鼠关节组织中瓜氨酸化蛋白、PADI2、PADI4、干扰素γ诱导蛋白30（IFI30）以及CD74的表达。它还抑制了p-ZAP70/ZAP70、诱导性T细胞共刺激因子、PD-1、IL-17水平，并降低了B细胞受体途径中p-LYN/LYN水平、p-Rac/Rac水平以及抗II型胶原抗体水平。此外，FHLJT减少了滑膜成纤维细胞标志物CD90和血管生成蛋白的表达，并抑制了破骨细胞标记物的活性。体外实验中，FHLJT抑制了M1型巨噬细胞的分化和MHC II的表达，同时促进了M2型巨噬细胞的分化。

结论：FHLJT通过青藤碱等74种化合物同时靶向RA的多种关键病理机制来发挥其治疗作用，这些化合物可调节瓜氨酸化蛋白产生、抗原呈递、TCR和BCR信号通路、滑膜增生、血管生成、破骨细胞分化以及PI3K-Akt和AMPK信号通路等过程。

图文摘要

【前言】

类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是以关节炎症、疼痛、肿胀和晨僵为主要特征的全身性自身免疫性疾病，可导致关节畸形、功能障碍，严重时可引发多系统损害，进而缩短患者预期寿命。目前，RA仍是一种无法治愈的疾病，其治疗主要依赖于“治疗达标”（T2T）策略，该策略强调通过早期和积极的干预来实现临床缓解或低疾病活动性。T2T目标的成功实现依赖于三个关键因素：早期诊断和治疗，使用缓解疾病的抗风湿药物（DMARD）诱导缓解，以及联合治疗。在多种改善病情的DMARDs中，对于RA患者，单一药物治疗的T2T达标率通常低于40%，很少超过60%，这使得联合治疗成为实现预期T2T治疗目标的关键策略。当前的生物制剂和靶向治疗主要集中在个体免疫途径上，这不足以应对RA的复杂病理生理学。此外，广泛使用不同机制的DMARD组合治疗通常受限于包括免疫抑制、肝脏和肾脏损伤、感染和恶性肿瘤等副作用的风险，这些限制凸显了迫切需要具有更广泛作用机制的新型疗法的必要性。

DMARDs联合治疗通过各种药物靶向RA的多种不同病理机制。传统合成DMARDs（csDMARDs）具有广泛的作用：甲氨蝶呤增强腺苷信号传递，柳氮磺胺吡啶抑制NF-κB，来氟米特耗尽尿苷，羟氯喹破坏自噬和TLR信号传递。生物学和靶向合成DMARD关注特定机制：利妥昔单抗靶向B细胞，阿巴西普靶向T细胞，阿那白滞素靶向IL-1受体。靶向肿瘤坏死因子（TNF）的阿达木单抗，与甲氨蝶呤相结合时，ACR50的反应从22％增加到36％。非戈替尼是一种JAK抑制剂，以JAK1为靶点，与甲氨喋呤一起将ACR50反应从44 %提高到58 %。这些药物提供了多种治疗类风湿性关节炎的方法。这些不同的DMARDs针对不同的RA病理机制。中医治疗类风湿性关节炎已有2000多年的历史，中医称之为“痹证”。中医的一个特点是其多成分、多靶点的治疗方法。例如，二妙散中的活性化合物(如槲皮素、橙皮苷和吴茱萸碱)通过抑制关键炎症因子如TNF-α、IL-6和IL-1β来治疗RA。在AIA大鼠中，乌头汤（WTT）中的麻黄可抑制NF-κB介导的炎症通路，其与黄芪联合可增强Nrf 2表达，从而促进抗氧化通路。值得注意的是，白虎桂枝汤中的活性化合物（例如芒果苷和肉桂酸）通过抑制TLR 4/NF-κB/NLRP 3活化和诱导细胞凋亡来减轻RA。这些研究强调了中医药在RA多组分和多靶点治疗中的潜力。然而，尽管这种方法很有希望，目前的研究主要集中在孤立的病理机制，尚未充分探索中医药的潜力，系统地针对多种关键RA机制。

乌头汤（WTT）是《金匮要略》中记载的一种中药方剂，经大量临床和基础研究证实对RA具有治疗作用。自2005年以来，作者的研究团队进行了一系列的研究，以提高WTT的疗效和安全性。这些努力最终在FHLJT的开发中达到顶峰，该药物由六种关键草药成分组成：青风藤、附子、白芍、虎杖、黄芪、生地黄。该复方已获得中国国家发明专利。本方中，青风藤用于祛风除湿，广泛用于治疗类风湿关节炎。附子通过其散风、散寒、化湿的能力，发挥抗风湿和抗关节疼痛的作用。白芍可有效缓解疼痛和急症，从而发挥抗炎和免疫调节作用。虎杖清热解毒，抗炎作用强，黄芪补气，增强免疫调节。生地黄通过补肾，对破骨细胞的生成也有很强的抑制作用，有助于RA的治疗。在处方优化过程中，网络药理学和实验验证表明大黄酸和芍药苷等活性化合物可以抑制p-JUN/JUN、PTGS 2和TNF-α的表达，从而有助于RA的治疗。与上述关于中医治疗RA的研究类似，FHLJT也尚未研究其对RA发病机制的系统性靶向能力。

本研究通过建立CIA大鼠模型，全面评价FHLJT对RA发病的影响，并通过转录组学分析，筛选FHLJT治疗后的差异表达基因（DEG），在此基础上进一步探讨FHLJT对RA关键病理过程的影响，包括瓜氨酸化抗原的产生、抗原提呈信号通路、T细胞受体（TCR）和B细胞受体（BCR）信号传导、滑膜增生、血管生成相关信号传导、骨破坏、破骨细胞活性以及AMPK和PI3K-Akt信号传导途径。证明了其靶向RA发病机制的全谱的能力，并为该疾病提供了全面的治疗策略。

【结果部分】

1.FHLJT成分的HPLC-MS分析。

2.FHLJT对CIA进展的治疗作用。

3.FHLJT治疗CIA大鼠的转录组分析。

4.FHLJT抑制CIA大鼠瓜氨酸化蛋白的产生。

5.FHLJT抑制CIA大鼠的抗原递呈信号途径。

6.FHLJT抑制CIA大鼠的适应性免疫反应。

7.FHLJT减少CIA大鼠的滑液增生和血管增生。

8.FHLJT抑制CIA大鼠破骨细胞分化并减轻骨破坏。

9.FHLJT调节CIA大鼠中的AMK和PI3K-Akt途径。

【结论与讨论】

总之，FHLJT通过包括青藤碱在内的74种化合物，显示出作为RA多靶点治疗策略的有希望的潜力。通过同时靶向多个关键病理机制，包括自身抗原表达，免疫调节，滑膜炎症，血管生成，骨破坏和代谢失调，FHLJT提供了一种全面的方法来解决RA复杂的发病机制，这些发现将FHLJT定位为现有RA疗法的可行替代或补充，提供更安全和更全面的治疗选择。为了最大限度地提高FHLJT的临床适用性，需要进行更多的研究，以查明产生其效益的确切组成部分和过程。

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