Alexa Fluor 594-Streptavidin Conjugate：AF标记链霉亲和素

品名：链霉亲和素偶联物 AF594标记（AF594-Streptavidin Conjugate）
结构等同于 Alexa Fluor 594 标记的链霉亲和素
用途：科研
一、基本描述
AF594-链霉亲和素偶联物是一种高亮度、高稳定性的荧光标记蛋白质探针，由四聚体链霉亲和素（streptavidin）与红色荧光染料AF594（结构等同于Alexa Fluor 594）通过共价方式偶联形成。该探针专一识别并结合生物素（biotin）标记的分子，适用于细胞成像、免疫荧光、原位杂交（FISH）、Western blot、流式细胞术等各种荧光检测技术。AF594具有激发/发射峰值为590/617 nm，荧光鲜亮，背景低，是红色通道中性能较佳的染料之一。
二、化学性质
荧光染料特性：AF594是一种改良型罗丹明类染料，具有高光稳定性、低pH敏感性和强荧光信号，适合用于激光共聚焦显微镜与荧光显微成像。其水溶性良好，不易发生自猝灭或聚集。
激发/发射波长：590 / 617 nm
荧光量子产率：约为0.66（在水中）
链霉亲和素特性：四聚体蛋白质，可与多达4个生物素结合，亲和力较高（Kd ≈ 10⁻¹⁵ M）；在pH 4~10范围稳定，兼容多种缓冲体系。
偶联比：每个链霉亲和素通常偶联3~7个AF594分子，在保持荧光强度的同时尽量避免对结合活性造成干扰。

三、制备方法
AF594-链霉亲和素通过化学偶联方法制备，通常采用如下步骤：
活化染料：使用AF594的NHS酯形式，该活性酯能与蛋白质的赖氨酸残基形成稳定的酰胺键。
偶联反应：将AF594-NHS酯与链霉亲和素在pH 7.58.5的缓冲液中混合，反应时间控制在0.52小时。
纯化过程：反应结束后通过凝胶过滤层析（如Sephadex G-25）去除游离染料，获得高纯度的偶联产物。
浓度与偶联率检测：使用UV-Vis光谱法检测蛋白和染料的吸收峰，计算偶联比。
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