品名:iFluor 350-标记链霉亲和素偶联物
英文名称:iFluor 350-streptavidin conjugate
用途:科研
一、产品描述:
iFluor 350-标记链霉亲和素是一种将高光稳定性蓝色荧光染料iFluor 350共价偶联至链霉亲和素蛋白的荧光探针,专为检测生物素化分子而设计。该产品结合了iFluor 350的优良光学性能与链霉亲和素对生物素的超高亲和力(Kd ~ 10⁻¹⁵ M),适用于各种需要高灵敏度检测和精确定位的生物实验,如原位杂交、免疫荧光标记、细胞成像及流式细胞术等。
二、化学性质:
iFluor 350染料:为改良型蓝色荧光染料,激发峰约为350 nm,发射峰在445 nm,具有比传统染料如AMCA更高的光稳定性与更亮的信号输出。
链霉亲和素蛋白:四聚体结构,每个分子可结合多达四个生物素分子,分子量约60 kDa。
偶联方式:通过NHS酯反应将iFluor 350的活性酯与链霉亲和素蛋白表面的赖氨酸残基共价连接,形成稳定的酰胺键。
修饰度控制:每个链霉亲和素上通常连接2~3个iFluor 350分子,以平衡荧光信号强度与生物素结合活性。
三、制备方法:
制备过程采用以下步骤:
使用高纯度链霉亲和素溶于PBS缓冲液中。
将iFluor 350 NHS酯溶于无水DMSO或DMF中后滴加至链霉亲和素溶液中,在pH 8.3的缓冲环境中反应。
通过凝胶过滤(如Sephadex G-25)去除游离染料与副产物。
检测吸光度和荧光强度,计算染料-蛋白比例(DOL)。
最终用无菌PBS或储存缓冲液冻干或液体保存。
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