浙江
出版日期：2021年
发表刊物：《Medicine and Therapies》
论文作者：Mi‑Rae Shin, Ji Hye Lee, Jin A Lee, Min Ju Kim, Hae‑Jin Park, Byeong Wook Park, Seung Bo Seo and Seong‑Soo Roh
本文通过化学分析和仪器检测，明确了桑黄胞外多糖（PPE）的结构，即主链由（1→2）-连接的甘露糖构成，且约半数在C-6位有分支，侧链含（1→3）-连接的甘露糖，末端主要为甘露糖，还有少量半乳糖和葡萄糖。PPE在体外能显著激活巨噬细胞，增强其吞噬能力，促进一氧化氮、肿瘤坏死因子和活性氧的生成，具备开发为免疫增强剂的潜力，但结构与免疫调节的关系有待深入研究。
研究背景
桑黄属真菌含有多种生物活性成分，在抗肿瘤、免疫调节等方面功效显著。其中，多糖是发挥作用的关键成分。野生桑黄资源稀缺，液体发酵技术可获取其菌丝体和胞外多糖。此前研究发现，P. pini产生的PPE主要由甘露糖组成，与其他桑黄多糖结构不同，且初步试验显示其有免疫刺激活性，因此深入研究PPE的结构和免疫调节作用意义重大。
桑黄胞外多糖的研究
多糖提取与纯化
采用液体发酵培养P. pini，经离心、减压浓缩、乙醇沉淀、凝胶色谱等步骤获取PPE，其纯度高、分子量为38.0kDa，主要由甘露糖（93.29%）、少量半乳糖和葡萄糖组成，且无内毒素污染。
结构分析方法
运用GC分析单糖组成，部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化分析和NMR光谱分析确定糖苷键连接方式和多糖结构。
免疫活性检测
提取ICR小鼠腹腔巨噬细胞（PMs），通过中性红摄取实验检测吞噬能力，利用格里斯试剂、ELISA试剂盒和活性氧检测试剂盒分别测定NO、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和活性氧（ROS）的生成量。
实验结果
PPE的结构
部分酸水解确定主链由甘露糖构成，支链或末端含甘露糖、半乳糖和葡萄糖；高碘酸氧化和Smith降解表明存在1,2-、1,6-和1,2,6-连接的甘露糖；甲基化分析显示主链为2-连接的甘露糖且C-6位有分支，分支链含3-连接的甘露糖；{13}C NMR光谱证实戊糖残基为吡喃糖形式，进一步明确各糖苷键连接方式，最终确定PPE的结构。
PPE对巨噬细胞的刺激作用
PPE能显著增强PMs的吞噬能力，在50 - 400μg/mL浓度范围内呈剂量依赖性；100 - 400μg/mL的PPE可显著提高NO、TNF-α和ROS的生成量，200μg/mL时效果最佳，且该剂量下生成量高于20μg/mL脂多糖（LPS）诱导的水平，但400μg/mL时会使生成量下降。
结构独特性
PPE是一种以甘露糖为主的多糖，其结构在桑黄属真菌中首次发现，与其他已报道的桑黄多糖不同。
免疫激活机制
PPE激活巨噬细胞的能力可能与其高甘露糖含量有关，巨噬细胞表面的甘露糖受体可优先结合甘露糖，引发免疫反应。此外，多糖的结构，如分支度和分子量，也可能影响其免疫调节能力，但具体机制需进一步研究。
结论
论文首次详细解析了P. pini产生的胞外多糖PPE的结构，丰富了桑黄多糖结构多样性的认知。深入研究了PPE对巨噬细胞的免疫激活作用，为桑黄在免疫调节领域的应用提供了新的理论依据。
研究者开展体内实验，评估PPE在动物模型中的免疫调节效果、安全性和药代动力学特性，为其开发成免疫增强剂或功能性食品提供更充分的依据。深入探究PPE的结构与免疫调节功能的关系，通过化学修饰、基因工程等手段改变其结构，研究结构变化对免疫活性的影响，明确构效关系，为精准开发利用桑黄多糖提供理论指导。
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