鸡免疫球蛋白G（IgG）检测试剂盒操作说明

本试剂盒用于检测鸡样本（如血清、血浆或细胞培养上清）中免疫球蛋白G（IgG）的浓度。研究者可使用该试剂盒分析鸡机体免疫系统状态，为免疫机制研究或疫苗免疫效果评估提供关键数据支持。

2. 检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）原理：

1. 酶标板预包被抗鸡IgG抗体，用于特异性识别样本中的IgG。
2. 样本或标准品中的IgG与酶标板上的抗体结合。
3. 酶标二抗（HRP标记）与IgG结合，形成抗体-抗原-抗体复合物。
4. 加入显色底物TMB后，发生酶促反应，显蓝色。
5. 终止液加入后，溶液变黄色，于450 nm处测定光密度（OD值），通过与标准曲线比较定量IgG浓度。

组分规格（96T）说明酶标板1块96孔板，预包被抗鸡IgG抗体标准品（鸡IgG标准浓度）6支配制标准曲线，稀释范围：0-2000ng/mL样本稀释液1瓶稀释样本使用酶标二抗（HRP标记）1瓶与IgG复合物结合，产生信号浓缩洗涤液（20×）1瓶配制洗涤工作液显色液（TMB）1瓶显示颜色，避免阳光直射终止液1瓶终止显色反应，溶液化为黄色说明书1份详细操作指南

三、样本要求

1. 样本类型 ：

   1. 鸡血清、血浆、或细胞培养上清液均可用于检测。

2. 样本采集与保存 ：

   1. 血清或血浆样本分离后应立即冷冻（-20 或 -80℃），避免反复冻融；细胞培养上清应去除颗粒杂质后保存。

3. 样本稀释 ：

   1. 样本稀释倍数因IgG浓度不同而有所差异，建议预先优化稀释比例。推荐起始稀释比例为 1:10-1:100，视样本浓度调整。

1. 将试剂盒中的所有试剂和样本从冰箱中取出，室温平衡20-30分钟。
2. 用去离子水或蒸馏水按1:20比例稀释浓缩洗涤液，配制成工作液。

按照说明书要求稀释标准品。推荐标准品稀释浓度范围：2000 ng/mL、1000 ng/mL、500 ng/mL、250 ng/mL、125 ng/mL、62.5 ng/mL、0 ng/mL（空白孔）。

3. 加样

1. 标准品：依次向酶标板对应的标准孔中加入50 µL的不同浓度标准品。
2. 样本：向检测孔加入50 µL稀释后的样本。
3. 阴性对照：向空白对照孔加入50 µL的样本稀释液。
4. 轻拍酶标板，确保加样均匀。

盖上封板膜，将酶标板置于37℃恒温箱中孵育30分钟。

5. 洗板（共洗5次）

1. 去除孔内液体（注意不要形成气泡或溅洒）。
2. 每孔加入200 µL稀释好的洗涤液，停留10秒后去除液体。
3. 用吸水纸轻轻拍干残余液体。

每孔加入50 µL HRP标记的酶标二抗，盖上封板膜，再次37℃恒温孵育30分钟。

7. 重复洗板

按照第5步，洗板5次以清除未结合酶标二抗。

8. 显色

1. 每孔加入50 µL TMB显色液，避光静置反应10-15分钟，观察颜色变化。
2. 一旦颜色适宜（浅蓝至深蓝），尽快加入终止液。

每孔加入50 µL终止液，溶液颜色由蓝色转为黄色，立即用酶标仪测定。

10. 检测与计算

在酶标仪上设置450 nm波长，读取各孔OD值。使用标准品绘制标准曲线，通过线性拟合计算样本IgG浓度。

五、注意事项

1. 标准品、样本及试剂应按要求稀释至合适浓度，避免因浓度过高或过低导致误差。
2. 洗板时尽量避免气泡或孔干，确保清洗充分，减少背景干扰。
3. 显色反应控制在10-15分钟，防止过度显色影响结果。
4. 酶标仪检测前确保显色反应终止，未及时终止可能导致数据误差。
5. 操作过程中应保持试剂无污染，避免重复使用移液器或稀释液瓶。

通过绘制标准曲线，计算样本对应的IgG浓度，结果单位为ng/mL。若样本浓度超出标准曲线范围，应对样本进行进一步稀释后重新检测。

七、储存与有效期

1. 储存条件

   1. 未开封的试剂盒应储存于2-8℃，切勿冷冻。
   2. 开封后未使用完的试剂需重新密封保存。

2. 有效期

   1. 产品有效期详见试剂盒外包装标签，建议在有效期内使用完毕。

优品生物研发的鸡IgG检测试剂盒凭借其高灵敏度和可靠性，受到广大科研用户的信赖。如有任何疑问或需要技术支持，欢迎联系我们的技术团队，我们将为您提供优质的服务！