技术革新前沿：重组鲎试剂在细菌内毒素检测中的突破性应用

细菌内毒素检测法（BET）依赖于鲎试剂来检测和定量药物及医疗器械中的细菌内毒素，传统上采用来自鲎变形细胞裂解物的天然鲎试剂。然而，随着市场对重组试剂需求的增长，以及针对天然鲎试剂存在的批次间差异、假阳性结果风险及环境影响等问题，新型重组级联试剂应运而生。其中，PyroSmartNextGen®重组鲎试剂作为全球首款完整的重组级联试剂，为细菌内毒素检测带来了革命性的改变。

一、PyroSmartNextGen®：革命性的重组级联试剂

PyroSmartNextGen®重组鲎试剂由三种酶凝因子——重组因子C（rFC）、重组B因子（rFB）以及重组凝固酶原（rPCE）组成，这些因子均源自T.tridentatus的克隆基因。这一创新设计不仅解决了传统天然鲎试剂存在的问题，还显著提高了检测的准确性和灵敏度。它的出现，标志着细菌内毒素检测领域的一大进步。

二、卓越的分析性能

根据ICHQ2指南和USP1225标准，PyroSmartNextGen®重组鲎试剂经过了严格的分析性能评估，包括准确度、精确度、特异性、定量限、线性度和范围等关键指标，结果显示，PyroSmartNextGen®重组鲎试剂方法验证的所有分析测试结果均符合验收标准，与天然鲎试剂相比，具有相当的兼容性和适用性。

（1）优异的线性表现：

所有标准曲线均达到了USP<85>中规定的计算相关系数验收标准（|r|≥0.980），表明其检测结果与预期值高度一致（表1）。

（2）高准确性：

速率检测和起始检测的准确性分别达到了84%至125%和71%至140%，均符合USP<85>的验收标准（50-200%），保证了检测结果的可靠性。

（3）重复性和中间精确度：

速率测定和起始测定的重复性分别在3%至21%和4%至30%之间，中间精确度的重复性也在7%至24%之间，均符合验收标准，表明检测结果稳定，可重复性好。

（4）出色的重现性：

在不同批次或不同时间点的检测中，速率测定和起始测定的可重复性分别在7%至17%和7%至22%之间，确保了检测结果的一致性和可靠性。

（5）宽广的检测范围：

在速率测定和起始测定中，检测范围分别覆盖了0.00625至0.1EU/mL和0.005至50EU/mL，满足了不同浓度内毒素的检测需求。

（6）定量限：

起始时间测定的定量限达到了最低标准0.005EU/mL，且在此浓度下，准确度和重复性均符合验收标准，表明该试剂对内毒素的检测具有很高的灵敏度。

（7）特异性高：

特异性高：在有(1→3)-β-D葡聚糖存在的情况下，该试剂不发生反应，表明其具有很高的特异性，避免了因其他成分干扰而导致的误检。（图2）

上图：速率测定，下图：起始测定

三、应用案例

（一）各种注射剂和散装药物中的内毒素检测

按照药典中BET所描述的干扰因素测试程序进行回收测试,检测了各种注射药物对PyroSmartNextGen®重组鲎试剂及其他重组试剂和天然鲎试剂反应性的干扰。

此外，还测试了阿昔洛韦、胰岛素、PBS和WFI。使用四种重组试剂和五种天然鲎试剂测量了内毒素回收率。需要对PyroSmartNextGen®重组鲎试剂的起始时间测定进行优化，以便仅对肝素钙中的内毒素进行适当测定,最小无干扰稀释因子(NID)如表2所示。

PyroSmartNextGen®重组鲎试剂通过采用三因子级联反应机制，提高了对于幽门螺杆菌GU2内毒素的反应性，速率测定比前代产品提升了9.5倍，起始时间测定则提升了4.4倍（图1），并在检测多种注射剂和散装药物中的内毒素时，展现出了广泛的应用潜力，其最小无干扰稀释因子（NID）优于同类产品，特别是在处理含有肝素钙的样本时表现更佳。

同时，相比天然鲎试剂和其他重组试剂，PyroSmartNextGen®重组鲎试剂在抑制和增强因子抗性方面表现出色，具备更高的敏感性。

（二）水和大肠杆菌O113:H10:K阴性培养上清液中的自生内毒素检测

通过检测水和大肠杆菌O113:H10:K阴性样本的培养上清液中的自生内毒素，评估了PyroSmartNextGen®重组鲎试剂与天然鲎试剂的可比性。（图3和图4）

结果显示，该试剂在检测这些样品中的自生内毒素时，展现出了与天然鲎试剂相当的稳定性和一致性，证明了其检测能力可与天然鲎试剂相媲美。

▲图3.用四种重组试剂和五种天然鲎试剂测量的八个地方采集的去离子水中的自生内毒素含量比较

▲图4.使用四种重组试剂和五种天然鲎试剂对市售瓶装水与大肠杆菌O113:H10:K(-)培养的上清液中的自生内毒素水平的比较

四、总结

PyroSmartNextGen®重组鲎试剂不仅克服了传统重组试剂的一些限制，还提供了与天然鲎试剂相当甚至更优的性能表现。随着2025年5月美国药典（USP）第<86>章“使用重组试剂的细菌内毒素测试”的正式生效，这一先进技术将在全球范围内得到广泛采纳。它为行业提供了一个更加可靠、环保的选择，以支持更高质量的安全标准。

未来，随着技术的不断进步和应用的深入拓展，PyroSmartNextGen®重组鲎试剂有望在细菌内毒素检测领域发挥更加重要的作用。