中药复方-1区TOP | 上中医曙光医院揭示芍药甘草汤促进自噬/线粒体自噬来保护APAP诱导的肝损伤

【写在前面】：本期推荐的是由上海中医药大学附属曙光医院等研究团队合作近期发表于Phytomedicine(IF6.7）的一篇文章，揭示芍药甘草汤通过促进自噬/线粒体自噬来保护APAP诱导的肝损伤。

【期刊简介】

【题目及作者信息】

背景

对乙酰氨基酚(APAP)诱导的肝毒性是急性肝衰竭(ALF)的主要原因，在此过程中，自噬作为一种细胞防御机制被触发。芍药甘草汤(SGD)是一种传统的中医处方，以其治疗肝脏疾病的效果而闻名。然而，SGD治疗APAP诱导的肝损伤的疗效和机制尚不清楚。

意图

本研究旨在为SGD对APAP过量的体外和体内保护作用提供有力证据，并阐明其肝保护机制和活性成分。

研究设计

采用体内和体外实验相结合的方法，研究SGD的肝保护机制和有效成分。

方法

采用小鼠模型和原代肝细胞法观察SGD对APAP诱导的肝损伤的保护作用。RNA测序和随后的实验验证揭示了SGD的肝保护作用的潜在机制。采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS对SGD进行了全面的化学分析，以确定潜在的有效成分。采用免疫组织化学、免疫荧光、实时荧光定量PCR (qPCR)、免疫印迹法(western blotting)、酶联免疫吸附法(ELISA)、流式细胞术等方法观察SGD对肝组织和肝细胞的特异性细胞变化。

结果

观察到SGD通过促进线粒体自噬来减轻APAP诱导的线粒体损伤、炎症和坏死。自噬的抑制否定了SGD的肝保护作用。 此外，对SGD的化学成分进行了详细的表征，发现Licoisoflavone B, Liquiritin, Liquiritin apioside, Licorice saponin G2和Paeoniflorin Sulfit是调控自噬和线粒体自噬的潜在关键化合物。

结论

SGD促进自噬/有丝自噬，有效减轻APAP诱导的肝毒性，表明SGD有潜力作为APAP诱导的肝损伤的治疗药物

【前言】

药物性肝损伤(DILI)是急性肝衰竭的一个普遍原因，对全球健康构成重大挑战。对乙酰氨基酚(APAP)作为一种常用的解热镇痛药，广泛应用于临床。作为一种直接的肝毒素，如果超过临界剂量或持续时间，几乎所有暴露于APAP的人都会发生肝损伤。目前临床治疗APAP引起的肝损伤的方法非常有限，N-乙酰半胱氨酸(NAC)是唯一可用的解毒剂。然而，其疗效明显受到治疗时间窗狭窄和潜在副作用的限制。因此，在临床实践中迫切需要额外的治疗方案来治疗APAP引起的肝损伤。

SGD起源于汉代，是由白芍和甘草组成的经典中药配方。几千年来，它一直被用来治疗肝脏疾病。最近的研究也表明，SGD在抗炎、调节肠道微生物群和抗肝损伤方面具有显著作用。然而，SGD对APAP诱导的肝损伤的疗效和机制尚缺乏足够的研究。在本研究中，我们在体外和体内提供了确凿的证据，证明SGD对APAP过量具有保护作用，并研究了其肝保护机制和有效药物成分。

【结果部分】

1.SGD可减轻APAP引起的小鼠肝毒性和死亡率。

2.SGD抑制APAP引起的小鼠肝脏炎症反应。

3.SGD在APAP代谢期后发挥肝保护作用。

4.通过转录组学和分子对接探索SGD抗肝损伤机制。

5.SGD促进APAP诱导的肝损伤小鼠自噬/线粒体自噬信号传导。

6.SGD通过促进原代肝细胞的自噬，改善APAP诱导的肝毒性和线粒体功能障碍。

7.自噬抑制阻断了APAP过量小鼠SGD的肝保护作用。

8.自噬抑制剂可阻止SGD体外抵抗APAP诱导的肝毒性。

9.SGD通过促进自噬/线粒体自噬对APAP诱导的肝损伤有保护作用的途径综述。

【结论与讨论】

SGD作为一种著名的中药处方，被广泛用于治疗肝脏疾病。但其在DILI中的有效药物成分和药理机制仍有待探索。作者首选使用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS鉴定了SGD的具体药效学成分，转录组学分析了SGD治疗诱导的基因表达变化，计算机模拟预测了药物-蛋白相互作用，最后进行了实验验证本研究表明，SGD可有效减轻过量APAP引起的肝损伤和炎症反应。同时进一步探究SGD是否会改变APAP的代谢激活，实验结果发现SGD并没有通过损害APAP代谢来抑制毒性APAP-ADs的产生，而是在APAP代谢阶段后发挥肝保护作用。转录组学分析表明，SGD显著上调自噬途径，从而去除受损的线粒体，从而减少ROS的产生。通过UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS对SGD的化学成分进行分析，同时对主要成分进行分子对接，发现几种SGD成分稳定地结合自噬/有丝自噬关键蛋白。此外，进一步的研究表明，SGD通过促进线粒体自噬来改善APAP诱导的细胞凋亡、坏死和线粒体功能障碍，同时自噬的抑制在体内和体外都减弱了SGD的肝保护作用。

综上所述，本研究首次揭示了SGD可能通过靶向Pink1/Parkin上调线粒体自噬途径来对抗DILI，提示SGD是一种有希望减轻APAP诱导的肝损伤的药物，这一发现也为SGD作为肝保护剂的分子途径提供了新的见解.

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