微源实验室：基因毒性(遗传毒性)杂质研究及多种检测方法案例

遗传毒性杂质，也称为基因毒性杂质，是能直接或间接损害DNA、引起基因突变或致癌的一类物质，通常在很低的含量或浓度水平下，即可对人体造成遗传物质的损伤。

2019年，Hetero Labs Ltd.宣布召回含有超限量N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）的氯沙坦钾片，2022年，辉瑞公司紧急召回某批次亚硝胺杂质含量超限量的降压药，均引发了极大的社会关注。

• 2006：欧洲药品管理局（EMA）发布《Guideline on the Limits of Genotoxic Impurities》

• 2008：美国食品药品监督管理局（FDA）发布《Genotoxic and Carcinogenic Impurities in Drug Substance and Products: Recommended Approach》

• 2017：国际人用药品注册技术协调会（ICH）发布《M7(R1) Assessment and Control of DNA Reactive(Mutagenic) Impurities in Pharmaceuticals to Limit Potential Carcinogenic》

• 2020：中国药典2020版四部新增《通则9306遗传毒性杂质控制指导原则》

随着分析技术的进步和创新，全球相关组织机构正在不断完善对于基因毒性杂质的控制策略。各监管机构对各合成活性药物中潜在的基因毒性杂质提出了管控措施和指导策略，对制药企业和监管技术机构提出了新的要求和挑战。

案例分享

Ⅰ.检测实验室采用超高效液相-三重四级杆质谱（UPLC-MSMS）法对某原料药中5种亚硝胺（N-亚硝基二甲胺NDMA、N-亚硝基二乙胺NDEA、N-亚硝基乙基异丙基胺NEIPA、N-亚硝基二异丙胺NDIPA、N-亚硝基二正丁胺NDBA）进行了方法学开发与验证，系统适用性、专属性、灵敏度、线性、准确度、精密度、溶液稳定性等验证指标均符合可接受标准，检测结果中各亚硝胺杂质残留量均符合限度要求，帮助委托方完成该品种的亚硝胺杂质风险评估。

Ⅱ .采用柱前衍生-气相色谱-质谱（PD-GC-MS）法对某原料药中3种磺酸酯（甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯）进行了方法学开发与验证，系统适用性、专属性、灵敏度、线性、准确度、精密度、溶液稳定性等验证指标均符合可接受标准，检测结果中各磺酸酯杂质残留量均符合限度要求，帮助委托方完成该品种的磺酸酯杂质风险评估。

Ⅲ 采用顶空进样-气相色谱-质谱（HS-GC-MSMS）法对某原料药中3种卤代烷（氯甲烷、氯乙烷、1,2-二氯丙烷）进行了方法学开发与验证，系统适用性、专属性、灵敏度、线性、准确度、精密度、溶液稳定性等验证指标均符合可接受标准，检测结果中各卤代烷杂质残留量均符合限度要求，帮助委托方完成该品种的卤代烷杂质风险评估。

Ⅳ 实验室采用柱前衍生-气相色谱-质谱（PD-GC-MSMS）法对某原料药中叠氮化物进行了方法学开发与验证，系统适用性、专属性、灵敏度、线性、准确度、精密度、溶液稳定性等验证指标均符合可接受标准，检测结果中叠氮化物杂质残留量均符合限度要求，帮助委托方完成该品种的叠氮化物杂质风险评估。

Ⅴ 采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱（UPLC-MSMS）法对某注射液制剂中API结构相关N-亚硝基化合物进行了方法学开发与验证，系统适用性、专属性、灵敏度、线性、准确度、精密度、溶液稳定性等验证指标均符合可接受标准，检测结果中该N-亚硝基化合物残留量均符合限度要求，帮助委托方完成该N-亚硝基化合物风险评估。

项目经验

√ 实验室积累丰富基因毒性杂质研究经验，完结亚硝胺等百余项基因毒性杂质检测项目，积累了警示结构的分析方法，包括亚硝胺类、磺酸酯类、叠氮类、肼类、卤代烷烃及酰卤类化合物、芳香胺和芳香硝基化合物、不饱和酮，醛类等已知的所有警示结构。

√ 为基因毒性杂质研究提供工艺评估、控制策略制定、分析方法开发、验证及放行检测等一站式解决方案。针对工艺进行全面评估，结合毒理学数据分析和法规解读，制定合理的控制策略，出具完整的评估及控制分析报告。

√ 至今已完成近50个品种的100多套基因毒性在杂质研究，采用LC-MS、GC-MS等高灵敏度仪器开发分析方法并验证，满足基因毒性杂质高难度限度极低等分析要求服务多家企业，符合各种法规要求帮助不同品种的研究资料申报成功。

指导原则

⇲ ICHM7评估和控制药物中DNA反应性（致突变）杂质以限制潜在的致癌风险第四版。

⇲ 2020版《中国药典第四部》9306遗传毒性杂质控制指导原则

文末总结

基因毒性杂质拥有限度低、结构多样、化学性质活泼等特点，使得研究面临诸多难点，实验室依据被测化合物的结构性质，选择气相或液相色谱技术或其与质谱联用技术，并通过柱前衍生化等步骤提高目标分析物的可检测性，提高样品中低浓度基因毒杂质的检测灵敏度，检测限甚至低至ppb，最大限度减少干扰，可同时进行多个品种，高通量项目的开展。

微源实验室帮助企业实现基因毒性杂质的严格检测、控制和预防，合理筛选工艺路线，识别警示结构，从源头上遏制基因毒性杂质的产生。为药品生产企业、创新企业、生物技术企业和新材料研发机构提供生物药工艺杂质研究、蛋白质残留研究、药物杂质分离鉴定、元素杂质研究等多项符合全球药政法规的药物质量研究服务。