响应USP-NF第<86>章，PyroSmart NextGen®重组鲎试剂的验证与应用

科德角国际的合作企业美国ACC公司（Associates Of Cape Cod）自2021年起，推出了PyroSmart NextGen®重组级联试剂(rCR)，标志着细菌内毒素检测（BET）领域的一次重大革新。

为了响应《美国药典-国家处方集》（USP-NF）收录第<86>章“使用重组试剂的细菌内毒素测试”，研究团队使用PyroSmart NextGen®重组鲎试剂（PSNG）对替代细菌内毒素测试方法进行了一系列的验证。

细菌内毒素检测（BET）是一项关键的质量控制流程，利用从鲎血液中提取的鲎变形细胞裂解物（LAL）试剂，有效检测和量化肠外药品及医疗器械中的革兰氏阴性菌内毒素。

PyroSmart NextGen®重组鲎试剂(PSNG)是市场上第一款完整的重组级联试剂(rCR)，包含重组C因子、重组B因子、重组凝固酶原。该试剂的核心优势在于其彻底消除了LAL试剂批次间的差异性，并避免了因（1→3）-β-D-葡聚糖凝结途径误触发的假阳性问题。此外，采用重组鲎试剂还符合动物福利保护的原则，推动了细菌内毒素检测技术的可持续发展。

在美国，重组试剂被认为是药典LAL试剂的替代品，因此，将这些重组试剂⽤于细菌内毒素检测需要进⾏验证，以证明结果等于或优于LAL试剂测定的结果。

本研究通过一系列分析性能评估，包括线性、准确度、精密度、检测范围、定量限及特异性等，依据USP<1225>和ICH Q2指南，对PyroSmart NextGen®（重组鲎试剂）、Pyrochrome®（显色法鲎试剂）及Pyrotell®-T（浊度法鲎试剂）根据内部验收标准进行了全面比较，证实了其等效性。

此外，还使用PyroSmart NextGen® 和两种LAL试剂对三个批次的肠外药物样品进行了测试，以便根据USP<1085> 和USP<85> 直接比较方法适用性结果。这一过程严格遵循了USP<1085>和USP<85>的标准，旨在通过实际样品测试来验证并对比各方法在检测细菌内毒素方面的适用性结果。

一、方法和结果

1、PyroSmart NextGen®的分析性能（非产品特定方法验证测试）

使⽤PyroSmart NextGen®定量的所有标准曲线浓度和三个单独制备的USP-RSE（美国药典参考标准内毒素）浓度均满⾜线性、准确度、精密度、范围和定量限规范（表1和表2）。因此，PyroSmart NextGen®的分析性能符合 USP<1225>和ICH Q2准则的规定。

2、PyroSmart NextGen®的方法适用性（产品特定测试）

使⽤三种PPC（阳性产物对照）浓度测试的三批注射用柠檬酸钠满足线性、准确度、精密度、范围、定量限、特异性和稳定性标准（表3和表4）。根据 USP<1085> 、USP<85> 、USP<1225> 和ICH Q2指南（杂质定量测试），PyroSmart NextGen®的产品特定⽅法适⽤性已得到证明。

3、PyroSmart NextGen®和LAL试剂的等效性测试

Pyrochrome®和Pyrotell®-T产生的结果均符合分析性能和方法适用性的内部验收标准。将LAL试剂与PyroSmart NextGen®直接比较表明，PyroSmart NextGen®在所有参数上均具有相同或更好的结果（表 1-表4）。

4、PyroSmart NextGen®的精密度

额外的精确度分析表明，PyroSmart NextGen®的最大变异系数为20.89%，而Pyrochrome®的最大变异系数为23.22%，Pyrotell®-T的最大变异系数为29.24%（图1）。这表明PyroSmart NextGen®在重复性测试中具有更高的稳定性和可靠性。

所有含有可检测（在本例中为添加）内毒素的样品（三个单独制备的USP-RSE浓度和注射用柠檬酸钠样品PPC）的相对回收率结果均在50-200%范围内（图2）。

二、结论

PyroSmart NextGen®展现出卓越的性能，能够有效从各类干扰药物中回收内毒素，其回收率与传统的LAL试剂相当。在针对如注射用柠檬酸钠等多种产品的测试中，PyroSmart NextGen®在产品特定的方法适用性数据中符合准确性和精密度要求。

依据USP<1225>及ICH Q2杂质定量检测指南，研究团队对PyroSmart NextGen®进行了包括线性、范围、定量限、特异性和稳定性在内的全面分析评估，所有结果均符合标准，PyroSmart NextGen®具备全面的分析能力。

作为一种先进的重组级联试剂（rCR），PyroSmart NextGen®完全符合所有内部验收标准，且在测试多种类型样品时，其表现等同于或优于天然来源的LAL试剂，为细菌内毒素检测领域提供了一种强有力的替代方案。

原文来源：

Madeline Kelley,Ingrid Stevens,etc.Report: A Demonstration of the Validation Process for Alternative Endotoxin Testing Methods Using PyroSmart NextGen® Recombinant Cascade Reagent.

American Pharmaceutical Review | Endotoxin Supplement 2023-ALTERNATIVE ENDOTOXIN TESTING.Page16-24.