常见菌落总数的操作方法

菌落总数又称需氧菌总数、嗜氧菌总数，在英文标准中的术语有Total plate count, Standard plate-count bacteria, Aerobic bacterial count，Colonies number等，是微生物学检测技术中应用最广泛的一种卫生学检测技术，亦是嗜温细菌和真菌的菌落总计数，其通过一定条件下如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等，每单位（如克、毫升等）检样所生长出来的微生物，在卫生学上可以表示被污染程度的标志。

常见操作方法

菌落计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（Most-Probable-Number Method，简称MPN法），其中平皿法可分为倾注平皿法和涂布平皿法，常见的菌落总数操作方法见表1。

表1 常见菌落总数的操作方法汇总

根据上表的适用范围和操作方法可得出，平皿法是使用范围最广。

根据测试标准适用范围和样品特性：
A. 平皿法因可操作性性强，会更多用于污染度高的被检样品；
B. 薄膜过滤法适用于测试量需求大且污染度一般的液体样品；
C. MPN法可用于微生物计数时精确度较差时，包括对于某些微生物污染度很小的样品。

故在日常测试中，可根据样品的污染度情况去选择更合适的菌落总数测试操作方法。

样品的取样量与稀释液选择

样品的取样量与其质量标准或测试方法去选择，对于官方标准未明确取样量的，亦可根据结果的代表性加大取样量。稀释缓冲液的选择则是要求样品在稀释缓冲液中能够充分混合，从而保证样品的均一性，故不同样品，会有不同的稀释液需求。日常工作中，常见的稀释缓冲液与要求见表2。

表2 常见的稀释缓冲液信息汇总

常见培养条件

菌落总数的培养条件会因不同的样品类型或制定机构而有所差异，其差异包括培养基、培养温度和培养时间的选择。菌落总数常见的培养条件见表3。

表3 菌落总数的常见培养条件汇总

结果观察与报告

菌落总数在进行计数时，肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（CFU/cfu，Colony Forming Units）进行报告。在计数时，首先需明确计数范围是否符合要求，从而保证测试结果的准确性和可靠性，不同的测试方法在首选计数范围会有一定差异，以及显色剂在观察中的应用也有一定的要求。详情见表4。

表4 结果观察与报告的一般要求

菌落总数的测定，不同样品有不同的特性，故在进行此方面卫生学测试时，结合行业需求，以及样品的生产工艺、消费对象、使用方式等需求，选择合适的测试操作流程，同时保证在报告结果时，亦需根据市场所选用的方法进行报告结果。

综合以上，卫生学的菌落测试在实验操作中虽然有差异，但总体的差异性不大，比如培养基都是非选择性生长培养基，培养温度基本在35℃左右，培养时间则温度越高，时间则可减少。故保证菌落总数测试结果的准确性与可靠性时，根据实际需求，通过调节测试方法的取样、稀释液、培养条件等来建立更符合本实验室的菌落总数测试方法。

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