多项自身抗体结果假阳性案例分析

作者 | 庞盼1，徐玉2，李玉3，郭瑞林1

单位 | 陕西中医药大学第二附属医院：1.检验科，2.普外肝胆一科,3. 儿童神经内分泌科

前 言

自身抗体是自身免疫性疾病的传统生物标志物,可以在许多方面促成精准医疗[1]。检测自身抗体有助于对疾病风险个体进行早期诊断，及时监测疾病活动情况，为患者进一步治疗以及预后评估提供实验基础。然而，从我院开展该项检测多年来第一次出现1例假阳性报告，假阳性报告的出现对于精准医疗来说简直就是天方夜谭，在这里，我们对该例特殊患者假阳性病例报告进行讨论分析，旨在探讨此类现象在临床检验中的出现的可能原因及处理措施。

案例经过

主要病史：患儿，女，1岁1月，主诉“患儿1天前无明显诱因出现发热，体温最高39.3℃，无畏寒、寒战，无抽搐，伴双侧手部出现较多红色皮疹，无痒感，予口服布洛芬后体温可降至正常，热退精神食纳尚可，4-6h反复，其他一般尚可”。以“确诊精神运动发育迟缓9月余”于2021-10-24入住我院儿童神经内分泌科。

诊疗经过：入院查体体温36.5℃，脉搏110次/分，呼吸28次／分，血压80/50mmHg。体重9.5kg,头围42.5cm，小头畸形，前囟未闭，特殊面容：双眼外眦上斜，眼距宽，上翻鼻，左耳廓畸形。精神一般，双手可见较多红色斑丘疹，略高出皮面，压之褪色无痒感。全身浅表淋巴结未触及肿大。咽部充血，扁桃体I°肿大，其上未见异常分泌物。心、肺及腹部查体未见明显异常；神经系统查体：四肢肌力III级，肌张力稍低。

入院后相关检查情况：

（1）血、尿、粪常规，肝肾功、电解质、心肌酶谱、血脂、静脉血糖、随机血糖、血沉、维生素D、甲功、甲状旁腺素，以上结果均未见明显异常。

（2）皮质醇激素673.2nmol／L，较正常稍高；促肾上腺皮质激素19.9ng／L正常。

（3）24小时尿电解质测定（因需插尿管，家属拒绝）。

（4）全腹CT(家属拒做，因去后续北京手术时需要重复再做），已完善肝胆胰脾＋子宫附件＋肾上腺淋巴结彩超，未见异常。

（5）已完善脑干诱发电位、中耳分析，耳鼻喉科会诊后建议：1.左耳听力下降2.进一步完善中耳CT.

（6）15小时脑电图已完善，提示异常脑电图。

（7）尿培养：阴性；粪培养：阴性。

（8）分肾功能（因需插尿管，家属拒绝）。

（9）自身抗体15项，多项阳性。

案例分析

该患儿用化学发光法检测自身抗体15项[包括抗核糖核蛋白/Sm抗原（nRNP/Sm），Sm抗原（Sm），干燥综合征A抗原/60kD（SSA/60kD），干燥综合征A抗原/52kD（SSA/52kD），干燥综合征B抗原/La（SSB/La），DNA拓扑异构酶1（Scl-70），多发性肌炎-硬皮病重叠综合征抗原（PM-Scl），组氨酰-tRNA合成酶（Jo-1），着丝点蛋白B（CENP B），增殖性细胞核抗原（PCNA），双链DNA（dsDNA），核小体，组蛋白，核糖体P蛋白（P0），丙酮酸脱氢酶复合物（AMA M2）15项核抗原抗体IgG]报告中抗硬皮病抗体阳性、SmD1抗体阳性、抗核小体抗体阳性、抗Scl-70抗体阳性、抗增殖细胞核抗原抗体阳性、抗组蛋白抗体阳性、抗着丝点蛋白B抗体阳性、抗Jo-1抗体阳性。

但由于其结果无特异性诊断意义，且与患者临床表现不相符，因此我们对以下问题进行排除：1.患儿血标本合格（空腹采血），没有乳糜血、溶血等情况，重新采血复查结果与以上一致。2.仪器运行正常，按时对仪器进行校准和维护，质控结果在控，试剂定标通过。在排除以上问题后，我们怀疑此结果可能是异嗜性抗体干扰引起血清多项自身抗体检测为假阳性，为了验证猜测，我们又做了如下测试。

实验方法：

1 化学发光法空腹采集橘色采血管2-3mL血标本，4000r/min离心10分钟，直接上机检测（仪器：HOB浩欧博SMART6500化学发光仪）。

2 样本采用非特异性吸附试剂处理

2.1样本采用非特异性吸附试剂处理后，进行化学发光法检测。空腹采集橘色采血管2-3mL血标本，4000r/min离心10min，吸取血清样本0.5mL放于非特异性吸附试剂（HOB浩欧博公司产品）冻干粉中，用移液枪反复吹打混匀5min后，5000r/min离心5min后取上清液，将此上清作为正常样本，进行上机检测。

2.2样本采用非特异性吸附试剂处理后，用条带酶免分析法进行检测。非特异性吸附试剂处理方法同2.1，自免膜条（浩欧博抗核抗体谱检测试剂盒）操作步骤如下：

①将抗原膜条置于孵育槽中，将带有文字标记的一面朝上；每槽加入1.5mL样品缓冲液将膜条室温下摇摆摇床轻微晃动5min，其后将其吸掉。

②每槽加入1.5mL稀释血清样品，室温下在摇床上轻微晃动孵育30min。

③吸去孵育槽中液体。然后，每槽加入1.5mL清洗缓冲液，室温下在摇床上轻微晃动5min，吸去孵育槽中液体。再重复洗涤2次。

④吸去孵育槽中液体。每槽加入1.5mL稀释后的酶结合物，室温下在摇床上轻微晃动孵育30min。重复步骤③。

⑤吸去孵育槽中液体，每槽加入1.5mL底物液，室温下在摇床上轻微晃动孵育10min。

⑥吸去孵育槽中液体。然后，每槽加入1.5mL蒸馏水或纯化水，室温下在摇床上轻微晃动1min，吸去孵育槽中液体。再重复洗涤2次。膜条干燥后，可将抗原膜条粘贴于结果记录单上，以便保存实验结果，结果的解释见图1。

图1 自免膜条结果解释图

结果

1 首次化学发光法检测结果该患儿在我院采用化学发光法检测自身抗体15项报告中抗硬皮病抗体阳性、SmD1抗体阳性、抗核小体抗体阳性、抗Scl-70抗体阳性、抗增殖细胞核抗原抗体阳性、抗组蛋白抗体阳性、抗着丝点蛋白B抗体阳性、抗Jo-1抗体阳性，见图2。

图2 首次化学发光法检测结果

2 采用非特异性吸附试剂处理后的结果

该患儿在我院采用化学发光法检测自身抗体15项报告多项结果为阳性，无特异性临床指导意义，且这些阳性抗体的检出与患儿临床表现不相符，因此我们重新按要求采血送至江苏浩欧博公司，通过非特异性吸附试剂处理后再次采用化学发光和自免条膜两种方法来检测验证实验结果。

2.1采用非特异性吸附试剂处理后化学发光的结果用非特异性吸附试剂处理后用化学发光法检测抗硬皮病抗体、SmD1抗体、抗核小体抗体、抗Scl-70抗体、抗增殖细胞核抗原抗体、抗组蛋白抗体、抗着丝点蛋白B抗体、抗Jo-1抗体结果均为阴性，见图3。

图3 非特异性吸附试剂处理后化学发光的结果

2.2采用非特异性吸附试剂处理后自免膜条的结果用非特异性吸附试剂处理后用自免条膜检测抗硬皮病抗体、SmD1抗体、抗核小体抗体、抗Scl-70抗体、抗增殖细胞核抗原抗体、抗组蛋白抗体、抗着丝点蛋白B抗体、抗Jo-1抗体结果亦为阴性，见图4和图5。

图4 膜条法检测结果图

左：实验组荧光图（阴性）

右：对照组荧光图（阳性）

图5 间接免疫荧光法结果图

总 结

自身抗体的检测对红斑性狼疮、抗磷脂综合征、类风湿性关节炎、干燥综合征、系统性硬化症、特发性炎症性肌病、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化和自身免疫性神经系统等疾病的诊断及治疗有重要指导意义，然而本研究患儿所患疾病比较复杂，体内存在多种特异性抗体即异嗜性抗体，由于这些异嗜性抗体的干扰出现多项自身抗体假阳性的结果。

异嗜性抗体（Heterophil antibody，HA）是一组定义不清的内源性抗体，其特点是大量的非特异性，能与许多不同的抗原分子发生反应，且发生的反应没有明确的免疫原[2-4]。

有研究表明，异嗜性抗体可能与自身免疫性疾病和其他炎症性疾病有关，在健康的个体中也会少量存在[5]。易出现异嗜性抗体干扰的患者可能是有动物接触史、食用受污染的（如未经高温消毒的鲜奶）食品史、单克隆动物抗体免疫治疗史、来源于动物组织或血清的疫苗接种史、感染史或输血史等[6-8]。

目前国内实验室所使用的免疫抗体试剂大多源于实验动物，再加上本案例中该患儿有宠物接触史和来源于动物血清的疫苗接种史，因此我们推测本案例患儿体内含有异嗜性抗体可能是与宠物接触和接种疫苗所产生，也可能是由于患儿病情较复杂，体内暴露的某些不明确的低亲和力抗原与免疫抗体试剂发生了非特异性结合所导致。

异嗜性抗体分子量较大，不易通过肾小球滤过膜，大多存在于血液中，又因其具有多特异性结合的特点，导致该案例多种自身抗体出现假阳性。

总之，因为异嗜性抗体对实验的干扰在临床检验工作中不常见，所以我们更要学会判断哪些结果是由于异嗜性抗体的存在导致的假阳性或者假阴性。

在临床检验工作中，如果在排除采血问题、仪器障碍、质控失控及定标失败等检验问题后，存在下列情况，我们应首先考虑是否存在异嗜性抗体的干扰：①出现多项指标升高且与临床症状不相符；②检测结果与近期历史结果相差甚远且无法解释；③与其他相关检测结果不一致时（如生化尿蛋白特别高，而体液尿蛋白阴性）④与其他测量方法值有明显的差异时（如化学发光法检测HBSAg强阳性，ELISA法检测HBSAg阴性）。

鉴于临床医生对检验结果的依赖程度，我们检验医生要杜绝一切假阳性/假阴性报告的发出，为临床医生对患者病情的诊断及治疗提供准确的实验数据。

参考文献

[1]Kayser C, Dutra LA, Dos Reis-Neto ET, et al. The Role of Autoantibody Testing in Modern Personalized Medicine[J]. Clin Rev Allergy Immunol, 2022,63(2):251-288.

[2]Kim D, Hong N, Cho Y, et al. Heterophile antibody interference associated with natural killer cell therapy[J]. Endocr J, 2020,67(12):1187-1192.

[3]Atkins P, Mattman A, Thompson D. Falsely elevated serum estradiol due to heterophile antibody interference: a case report[J]. Arch Endocrinol Metab, 2021, 65(2):237-241.

[4]Kavsak PA, Ainsworth C. A heterophile antibody affecting a contemporary but not a high-sensitivity cardiac troponin assay[J]. Clin Biochem, 2019, 71:72-73.

[5]Murryam S, Cook P, Ellis S. The false positive troponin results: case studies of analytical interference[J]. Clin Med (Lond), 2022, 22(1):87-88.

[6]Bolstad N, Warren DJ, Nustad K. Heterophilic antibody interference in immunometric assays[J]. Best Pract Res Clin Endocrinol Metab, 2013, 27(5):647-661.

[7]Cheng X, Guo X, Chai X, et al. Heterophilic antibody interference with TSH measurement on different immunoassay platforms[J]. Clin Chim Acta, 2021, 512:63-65.

[8]Wu Y, Xiao YX, Huang TY, et al. What makes D-dimer assays suspicious-heterophilic antibodies?[J] J Clin Lab Anal, 2019, 33(2):e22687.

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编辑：徐少卿 审校：陈雪礼