上海
某些中药制剂具有较强的抑菌作用,需要采用薄膜过滤法对其进行微生物限度检查。在过滤过程中,供试品溶液中的不溶杂质常使0.45μm微孔滤膜阻塞,从而导致过滤速度极慢甚至不能过滤,极大地影响了检验的进行。如果前期能用某种滤材过滤掉供试液含有的大量极细粉及不溶性物质,则能极大地提高0.45μum滤膜的过滤速度,从而提高检验的效率和准确性。笔者考察了检验中常见的几种滤材,以确定其是否可用于供试液的过滤前处理。
1环境与仪器、材料
环境为环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内。开放式薄膜过滤器(滤孔直径0.45μm)（上海那艾仪器/NAI-STV3）;医用脱脂棉;医用脱脂纱布;中速定性滤纸。实验菌株为大肠埃希菌Escherichia coli.、金黄色葡萄球菌Saphylococcus aureus.、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.白色念珠菌Candida albi-cans..黑曲霉Aspergillus niger。培养基包括营养琼脂培养基,玫瑰红钠培养基,营养肉汤培养基,改良马丁培养基。试验菌株及培养基均购自中国药品生物制品检定所。稀释液及冲洗液为pH=7.0的无菌氯化钠-蛋白胨.缓冲液。
方法与结果
2.1菌液制备
分别取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌,置营养肉汤新鲜培养液中培养18-24h,白色念珠菌置改良马丁液体培养基新鲜培养液中培养18 ~24 h,用0. 9%无菌氯化钠溶液洗脱曲霉孢子,按2005年版《中国药典(一部)》微生物限度检查法项下规定制备成50 ~ 100 CFU/mL的菌液。
2.2滤材制备
取医用脱脂棉5g,制成直径11 cm的均匀圆饼;取纱布折叠32层,用剪刀剪成直径11 cm的圆饼;另取滤纸- -片(直径11 cm)。将上述3种滤材在121C下湿热灭菌。
2.3菌液组回收率测定以规定浓度的菌悬液作为对照菌液A,取1 mL,培养,计数;另
将对照菌液A分别用不同滤材过滤,续滤液作为对照菌液B,取1 mL,培养,计数。平行做3次试验。回收率按下式计算:回收率=对照菌液B平均菌落数/对照菌液A平均菌落数x 100%。。可知,用医用脱脂棉、医用脱脂纱布过滤,回收率均接近100%,证明其对细菌、霉菌无拦截作用;采用滤纸过滤,几种菌回收率为20%~50%，可见其对细菌、霉菌有明显的拦截作用,不宜作为预处理用滤材。
讨论结果表明,用灭菌后的医用脱脂棉预先滤除不溶性杂质,能在不影响试验结果的情况下,有效增加薄膜过滤法的过滤速度,提高试验效率,减少误差。医用脱脂棉具有价格低廉、滤孔细密、操作快速等优点,因此在采用薄膜过滤法的微生物限度检查中,医用脱脂棉作为含有较多悬浮物或其他不溶物质的供试液的预处理材料是可行的。
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