江苏
作者：高晓双
新型冠状肺炎的最主要的检查方法就是核酸检测，核酸检测在疫情防控中发挥了重要的作用。“内标”在单个核酸样本本身的检测环节又起了举足轻重的作用。
下面我们大家结合核酸检测实验室近期经常遇到的核酸样本的内标扩增异常的情况进行讨论分析。
核酸检测中大部为内源性内标，内源性内标存在于人的基因组内，可以监测每一个检验环节，包括检验前，检验中，检验后等。
01
检验前
问题：采样人员在核酸内标基因检测过程中有什么作用？
回答：新冠检测核酸样本采集和运送在检测中的作用极为关键。
1.采集部位：用拭子棉头擦拭双侧扁桃体及咽后壁。采样人员不要认为容易让人干呕就忽视了正确采样的重要性，否则会增加假阴性概率，或者无内标导致样品不合格的概率。
2.条码信息：条码信息可以使每一个样本可控可追查可溯源，核酸检测结果与全国健康码进行绑定，如若条码粘贴不平整，84消毒液或者酒精喷洒过度导致条码模糊不清后结果无法上传，将以不合格标本待之。
3.样本保存及运送：样本运送期间避免反复冻融。部分采样管质量参差不齐，也可导致病毒快速降解。所以为了避免检测假阴性情况，更应该规范采样后尽快送检，这样至少可以保证大多数采样管的保存液的有效性，不会对检验质量造成过多的影响。
02
检验中
问题：核酸标本送到实验室以后，检验人员如何做？
回答：检验人员收到核酸样本以后，需要严格按照操作流程规范进行。
1.试剂制备区 根据试剂盒说明书的要求配置扩增试剂，扩增体系的试剂配置必须要做到混匀再瞬时离心，分装过程中一定要避免产生气泡和保证试剂量的准确。加盖或封膜以后通过传递窗传到标本制备区，以防外环境污染。
2.标本制备区 二区的最关键在于样本核酸的提取， 标本量大，机器多，人员多，所以需要固定人员搭配，固定生物安全柜，固定提取仪，分别在布板单上写清，注明，特别是整板内标失败的原因就容易溯源分析解决。近两年来疫情频发，防控严峻复杂更要求标本处理人员“快、稳、准”，避免喷溅，样本错加、漏加等人员情况也是内标基因失败的重要原因。八连管的匹配度，核酸检测反应体系、提取及人员操作也很关键。
3.扩增区 扩增区人员要求细心、谨慎，具有丰富的经验，熟练掌握pcr理论，分析结果的能力。随着封控区的增加，混管单采类的的样本也特别多，整体内标离散的情况比较常见，内标基因ct值普遍偏高，若排除检验前质量问题，样本未充分震荡混匀和扩增体系配置时未充分震荡混匀也是重要原因之一。关于混采管单采无内标的样本，适当加大加样量也不失为一个好的方法。如若有相邻的多个内标未起，首要考虑提取试剂和机器的问题，扩增体系配置的问题。扩增后扩增产物密封，杜绝扩增产物污染环境，全方位的酒精擦拭消毒，紫外线消毒。
03
检验后
问题：检验后标本处理和结果上传
回答：标本处理过以后一定要分类分区整齐的摆放好，结果完全上传以后再处理，以备复查。因为大部分核酸检测机构无法与lis对接，结果上传一直都是大工程，每一个布板建立不同文档，按照每个板上编号先后顺序依次扫码，待到扩增结果出来以后再分别上传，如果此板上有阳性结果就需要输入ct值以后，慎重的核对再核对，以防输入错误导致的假阴性或者假阳性。
总结：三个区之间杜绝人员来回流动，严格执行物品专区专用，检验前，中，后各个环节，环环相扣，这样才能确保结果的准确性和可靠性。
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