为什么要20合1混样？能不能混的更多？

来源：检验时间

20 合 1 来了！

图源：卫健委官网

我们先梳理一下新冠病毒核酸混样检测的历程：

1.2020 年 7 月 21 日：5 合 1 混样

2020 年 7 月 21 日国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制医疗救治组发布了《新冠病毒核酸筛查稀释混样检测技术指引》

部分内容如下：

一、适用对象

新型冠状病毒核酸筛查稀释混样技术（以下简称稀释混样）仅适用于大人群样本的筛查，稀释混样检测结果不作为最终确诊依据。在人群总体阳性率较低（低于 0.1%）时更为适宜。以下人群不建议采用稀释混样检测：

（一）重点区域人群（近期有疫情发生的小区含确诊病例和无症状感染者、老旧小区、人口密集小区、流动人口聚集区和近期离省外出人群）、其他不适合稀释混样检测的人群；

（二）医疗机构就诊患者。

二、采样与混合的操作流程

1.咽拭子采样方法。被采集人员头部微仰，采样者将拭子越过舌根，在被采集者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少 3 次，将拭子头浸入含 1～3 mL病毒保存液（也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液）的管中，尾部弃去，旋紧管盖。

2.样本混合。将采集的数个样本（原则上不超过 5 个）各取 200 uL 进行充分混合，形成混合待检样本。

该技术指引重点强调了适用条件和实验室条件，混样数量不超过 5 个。

2.2020 年 8 月 17 日：10 合 1 混样

2020 年 8 月 17 日国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制医疗救治组发布了《新冠病毒核酸 10 合 1 混采检测技术规范》

10 合 1 混采检测技术规范从样本采集耗材规格、采集地点要求、采集流程、标本送检、实验室接收、标本检测与质量控制、检验结果处理、检测后样本处理、技术人员基本要求、生物安全防护等十个方面详细规定了相关的技术细节。

部分内容如下：

一、样本采集耗材规格

（一）病毒采集管。

管帽和管体应当为聚丙烯材质，螺旋口可密封，松紧适度。管体透明，可视度好。试管外径（14.8±0.2）mm×（100.5±0.4）mm, 管帽外径（15.8±0.15）mm，高度（12.5±0.5）mm。容量企业定标 10 mL，内含 6 mL 胍盐或其他有效病毒灭活剂的保存液。保存液应当带有易于观察、辨识的颜色（如粉红色），并保持一定的流动性，方便取样。

（二）采集拭子。

宜选用聚酯、尼龙等非棉质、非藻酸钙材质的拭子，且柄部为非木质材料。折断点位于距拭子头顶端 3 cm 左右，易于折断。

3. 2022 年 1 月 17 日：20 合 1 混样

国务院联防联控机制医疗救治组积极组织专业机构和专家论证，研究提出进一步提高核酸检测效率的技术方法。经开展临床真实样本验证，在确保核酸检测质量的基础上，决定稳步实施 20 合 1混采检测技术，并组织制定了《新冠病毒核酸 20 合 1 混采检测技术规范》。

20 合 1 混采检测可大幅度提高检测效率，更加适用于大规模人群核酸筛查工作。与 10 合 1 混采检测技术相比，主要是在采样管方面做出调整。

共分为 10 个部分，主要包括：样本采集耗材规格、采集地点要求、采集流程、标本送检、实验室接收、标本检测与质量控制、检验结果处理、检测后样本处理、技术人员基本要求、生物安全防护等。

部分内容如下：

一、样本采集耗材规格

（一）病毒采集管。管帽和管体应当为聚丙烯材质，螺旋口可密封，松紧适度。管体透明，可视度好。采集管高度（含管帽）（100±5）mm，容量企业定标 20 ~ 30 mL，内含 11 ~ 12 mL 胍盐或其他有效病毒灭活剂的保存液。保存液应当带有易于观察、辨识的颜色（如粉红色），并保持一定的流动性，方便取样。

（二）采集拭子。宜选用聚酯、尼龙等非棉质、非藻酸钙材质的拭子，且柄部为非木质材料。折断点位于距拭子头顶端 3 cm 左右，易于折断。

二、采集流程

（一）标识及信息登记。

1.登记流程。工作人员在采集前分配 20 个受检者为一组，采集前收集并登记受检者相关信息（包括姓名、性别、身份证号、联系电话、采集地点、采集日期和时间），按照组别进行采集管编号。因 20 人相对较多，为避免不同组人员弄混，采样时，可采用 2 米线将下一组等候人员与正在采集的一组人员严格分隔开来，该组人员采完后，下一组人员才能有序进入采样区。

2.登记要求。推荐使用身份证读卡器、二维码条码等信息化手段关联受检者信息，提高信息读取效率和准确性。

为什么要混？

假定混样不会造成检测敏感性下降，即阳性样品混样后仍然能检测为阳性。

在这个前提下，混样的决策取决于流行率或者称为阳性率（P）和混样数量（k）。如果我们只进行 2 步的检测，即第一步检测混样组，检测为阳性的组进行第二步检测，第二步将阳性组样品逐一进行检测。

假定 1% 阳性率的情况下 20 混 1 检测

1% 阳性率的情况下，20 混 1 检测。如果有 100 个样品，分为 5 组，第一轮检测结果为 4 组阴性和 1 组阳性，阳性组再进行第二轮逐一检测，检测结果为 19 份阴性和 1 份阳性（或者第二轮检测时只检测 19 份样品即可得到最终结果）。在这样的前提下我们如果不混样需要进行 100 次检测，混样后只需进行 25 次检测，节省了 75% 的检测量。(少拧的盖子不计其数~)

混样检测的极限在哪里？

最佳混样数量的计算方法：（看不懂没关系，可以跳过这里~）

混样效能计算公式：首先混样的结果中只有阴性或阳性，每次试验都是相互独立的随机事件。

阳性率为，混样数量为，则有：

1.检测为阴性的组，每个样本平均的检测次数为，概率为；

2.检测为阳性的组，每个样本平均的检测次数为，概率为；

预期每个样品的检测次数E（x）为：

总的预期检测数量，也称为混样检测效率F：

F=1/E（x）

预期每个样品的检测次数E（x）越低，代表着混样检测越划算，1-E（X）则表示检测量减少的比例。

图源：原博士带你做检测

混样检测的前提是预期阳性率。当阳性率在 1% 时，最佳混样数量是 11 混 1，当阳性率是 5% 时最佳混样数量是 5 混 1。

当阳性率为 0.1% 时，根据计算，理论上 100 混 1 仍然是可行的，但是这个公式的前提是不论多少混 1，只要混样中有 1 个阳性都能检出。

在现实当中，混样检测之前除了需要先预估阳性率，并且要考虑检测系统的灵敏度，以及对混样可能造成的漏检（假阴性）风险进行评估。

《新冠病毒核酸 20 合 1 混采检测技术规范》的出台，对新冠病毒核酸检测的灵敏度又提高了要求，500 拷贝/毫升的最低检测限的标准可能也需要更新了，很多大体积提取试剂和高灵敏度的扩增试剂厂家已经摩拳擦掌了。

资料来源：国家卫健委、原博士带你做检测