1822年，佛罗里达行政长官杰克逊卸任职务并离开了佛州，行政长官一职由威廉·波普·杜瓦尔接任，同时，汉弗莱斯出任佛罗里达的印第安事务代理人。
1823年4月，卡尔霍恩任命詹姆斯·加兹登、杜瓦尔和塞古伊为谈判代表团成员，与塞米诺尔人进行关于保留地的谈判工作。1823年9月，美国代表团在圣奥古斯丁南部的莫尔特里溪同米卡诺皮和贾姆普尔两位酋长率领的425名塞米诺尔人进行初步会谈。
9月6日，谈判正式开始。加兹登在开幕词中用尽花言巧语，希望塞米诺尔人集中迁到保留地，遭到塞米诺尔人的谈判代表内马斯拉的坚决拒绝。最终经艰苦谈判，双方9月15日达成条约初步框架，18日，内马斯拉与4位印第安酋长正式和美国签署了《莫尔特里溪条约》。
根据条约，塞米诺尔人放弃了对除保留地外整个佛罗里达半岛的所有权，居住在400万英亩（约1.62万平方公里）的保留地里面，而保留地的范围，向北到达今天的奥卡拉北部，向南到达坦帕湾以南和大沼泽地以北，向东距离大西洋和向西距离墨西哥湾都不少于20英里，这样的设置某种程度上也是为了断绝塞米诺尔人同古巴的西班牙人之间的联系。
条约还规定美国负有保护保留地内塞米诺尔人（只要塞米诺尔人在保留地遵守美国法律）和禁止塞米诺尔人发动战争的责任和义务；为他们提供足够的必需品和牲畜作为补给，价值6000美元，同时还要给他们每年5000美元的年金，为期20年。
1824年，随着参议院的批准，该条约被国会通过。它的签订，意味着美国将佛罗里达半岛上超过85%的土地给了白人移民，从此，白人移民在这里修建道路，建设城镇，并在半岛逐步扎根；塞米诺尔人虽然留在了佛罗里达，但是他们的生存空间却被限制在了狭小的保留地里面，并严重依赖美国；保留地位于佛罗里达半岛的内陆地区，土地贫瘠，难以种植农作物，也难以捕猎。虽然美国不断地进行援助，但是无法改善他们的贫穷状况。
也正因如此，随处可见塞米诺尔人走出保留地，抢夺白人饲养的家畜的事件。同时，随处可见到保留地搜捕黑奴的白人，许多白人甚至以断绝补给为威胁迫使塞米诺尔人交出黑奴，这也引起了塞米诺尔人的愤怒。凡此种种，都让塞米诺尔人对迁入保留地极其抵触，尽管米卡诺皮酋长呼吁塞米诺尔人迁入保留地，但是真正进入的仅1000余人，只占一小部分。
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