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人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)ELISA Kit
作者：深圳市恒昊生物科技有限公司
血管内皮细胞生长因子C（Vascular Endothelial Growth Factor C，简称VEGF-C）是VEGF家族的核心成员之一，主要功能是调控淋巴管内皮细胞的增殖、迁移与分化，在淋巴管生成、肿瘤淋巴转移、炎症反应及组织水肿等生理病理过程中发挥关键作用。人VEGF-C ELISA Kit是针对人源生物样本中VEGF-C蛋白定量检测的标准化免疫学试剂套装，广泛应用于肿瘤预后评估、淋巴管生成机制研究、炎症疾病进展监测等领域。
注意事项
VEGF-C是低丰度分泌型蛋白，操作不规范极易导致结果偏差，需在实验全流程严格遵循以下要求：
（一）样本收集与保存
- 样本类型适配性：优先选择试剂盒说明书明确支持的样本类型，常见适配样本及注意事项：
- 血清：采用无热原、无内毒素的采血管，血液采集后室温静置30-60分钟待其自然凝固，3000rpm离心15分钟分离上清，避免溶血（溶血会释放细胞内蛋白干扰检测）；
- 血浆：推荐使用EDTA或柠檬酸钠抗凝管，禁止使用肝素抗凝，肝素会与VEGF-C发生非特异性结合，导致检测结果偏低；
- 细胞培养上清：收集上清前需确认细胞活性，避免死细胞释放的蛋白干扰，收集后10000rpm离心10分钟去除细胞碎片，取上清检测；
- 组织匀浆：需使用含蛋白酶抑制剂的匀浆缓冲液制备，避免VEGF-C被组织内的蛋白酶降解。
样本储存规范：样本采集后需在24小时内完成检测，否则需分装后置于-20℃保存（可稳定1个月），长期保存需置于-80℃（可稳定6个月），严禁反复冻融，反复冻融会导致VEGF-C蛋白变性，检测值最高可降低30%以上。
（二）试剂准备
- 室温平衡：试剂盒从4℃冰箱取出后需在室温（20-25℃）平衡至少30分钟再开封使用，低温会导致抗体结合效率下降，整体吸光度偏低；未用完的板条需立即放入密封袋，加入干燥剂后重新放回4℃保存，避免抗体失活。
- 标准品稀释：标准品冻干粉溶解时需加入说明书指定体积的稀释液，充分涡旋混匀后静置10分钟确保完全溶解，随后按照说明书梯度稀释制备至少5-6个浓度梯度的标准品，禁止一步稀释，梯度稀释误差会直接导致标准曲线偏移。
- 浓缩液配制：浓缩洗涤液若出现结晶，需置于37℃水浴至结晶完全溶解后再用去离子水稀释，避免洗涤液浓度不足导致非特异性结合残留，升高背景值。
（三）实验操作流程
- 加样规范：加样时枪头避免触碰孔壁，不要在孔内产生气泡，每个样本/标准品建议设置2-3个复孔，同一批次加样时间控制在10分钟内，避免不同孔间反应时间差过大；加样后及时封板，避免样本蒸发或异物落入。
- 孵育控制：严格按照说明书要求的温度和时间孵育，37℃孵育时建议使用湿盒，避免液体蒸发；禁止随意延长孵育时间，过长孵育会增加非特异性结合，导致背景值升高、假阳性风险增加。
- 洗涤操作：每轮洗涤需保证洗涤液注满微孔，静置30-60秒后充分甩干，洗涤次数严格遵循说明书要求，不要随意减少洗涤次数；洗涤不充分是导致板间差异大、结果重复性差的最常见原因。
- 显色与终止：显色过程需避光进行，当标准品最高浓度孔的吸光度达到1.5-2.0、梯度显色差异明显时即可加入终止液；终止液加入后需轻轻振荡混匀，在15分钟内完成酶标仪检测，放置时间过长会导致有色产物降解，吸光度出现漂移。
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