人白介素18(IL-18)ELISA Kit
人白介素18(IL-18)ELISA Kit人白介素18(IL-18)ELISA Kit
什么是人白介素18(IL-18)ELISA Kit
人白介素18(Interleukin-18,IL-18)是一种多功能促炎细胞因子,主要由活化的巨噬细胞、树突状细胞等免疫细胞分泌,能够诱导干扰素-γ产生、促进T细胞增殖分化,在炎症反应、免疫调节、抗感染和抗肿瘤免疫中都发挥着关键作用,同时也和类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、心血管疾病等多种炎症相关疾病的发展密切相关,因此精准检测样本中IL-18的含量,对科研研究和临床辅助诊断都有重要意义。
人白介素18(IL-18)ELISA Kit就是为满足这一检测需求开发的成套试剂,它将实验所需的所有预配制试剂整合在一起,包括包被了特异性IL-18抗体的96孔板、标准品、检测抗体、酶结合物、显色液、终止液、浓缩洗涤液等,科研人员不需要自行核心试剂,按照说明书流程操作,就可以快速定量检测血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等样本中人IL-18的浓度,不需要大型特殊设备,适合大多数实验室开展检测。
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注意事项
IL-18属于微量细胞因子,样本中含量较低,对实验操作的敏感度要求较高,操作中任何细节疏漏都可能导致结果偏差,实验过程中需要注意以下几点:
(一)试剂与样本准备环节
- 试剂盒从冰箱取出后,需要在室温平衡20-30分钟,让所有试剂温度恢复到室温,尤其是显色液,温度不均会导致显色速度不一致,影响孔间差;未用完的试剂要按照要求密封放回对应温度保存,避免酶标抗体失活或者试剂污染。
- 待测样本要及时处理:血清血浆样本采集后要尽快分离,避免反复冻融,反复冻融会导致IL-18降解,使检测结果偏低,如果不能及时检测,要分装后保存在-80℃冰箱,检测前一次融化,避免多次冻融;组织匀浆样本要充分裂解后离心取上清,去除杂质沉淀,避免堵塞孔道或者非特异结合。
- 标准品稀释要准确:标准曲线的准确性直接决定样本浓度计算的可靠性,稀释标准品时要逐级充分混匀,避免稀释误差,尽量采用现用现配的方式,不要提前稀释放置。
(二)加样操作环节
- 加样时尽量将样本加在孔底,避免溅出或者加到孔壁上方,同时注意不要产生气泡,气泡会导致酶标仪读数误差;不同样本之间要更换枪头,避免交叉污染。
- 如果样本中IL-18浓度过高,超出试剂盒检测范围,需要提前对样本进行梯度稀释,保证检测OD值落在标准曲线的线性范围内,得到更准确的结果。
(三)洗涤环节
洗涤是去除非特异结合、降低本底背景的关键步骤,很多实验结果偏差都和洗涤不到位有关:
- 要严格按照说明书次数洗涤,不能随意减少洗涤次数;手工洗涤时,每孔要注满洗涤液,每次洗涤后充分拍干孔内残留液体,去除未结合的游离蛋白,降低背景噪音。
- 洗涤过程中不要让微孔板干板,一旦干板会导致包被抗体变性或者非特异吸附,整板实验结果作废。
(四)显色与读数环节
- 显色反应要避光进行,温度控制在说明书要求范围(一般为室温或37℃),显色时间不能随意延长或者缩短,避免显色不足或者过度显色,导致线性范围偏移。
- 终止反应后要在10-15分钟内完成读数,时间过长会导致底物继续反应或者沉淀产生,影响吸光度准确性;读数前要轻轻擦去微孔板底部的水渍和指纹,避免影响透光率。
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