人细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA Kit
供应商:深圳市恒昊生物科技有限公司
在免疫学和分子生物学研究中,酶联免疫吸附实验(ELISA)是定量检测样本中微量蛋白的经典技术,而人细胞间粘附分子3(ICAM-3,又称CD50)ELISA Kit,就是专门针对人源样本中ICAM-3/CD50蛋白浓度进行检测的商品化预包装试剂盒,为科研工作者提供了便捷、稳定的检测方案。
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注意事项
为了保证检测结果的准确性和重复性,使用过程中需要注意以下几点:
(一)样本处理与保存
- 根据实验目的选择合适的样本类型:血清样本建议使用不添加抗凝剂的静脉血,室温静置凝固后离心分离;血浆推荐使用肝素钠或EDTA抗凝,避免使用肝素锂抗凝,部分抗凝剂可能会影响抗原抗体结合;细胞培养上清需要提前离心去除细胞沉淀和杂质,冻存前去除沉淀分装;组织样本需要充分匀浆离心后取上清检测。
- 样本收集后如果不能及时检测,应该分装后-20℃避光冻存,避免反复冻融:反复冻融会导致蛋白降解,使得检测结果偏低;长期保存建议置于-80℃,避免样本降解。
- 避免使用溶血、高血脂样本:溶血会释放大量血红蛋白,干扰酶促反应,导致OD值异常升高,影响结果准确性。
- 显色,导致背景升高。
操作过程
- 加样时尽量保证加样速度,避免第一个孔和最后一个孔反应时间差过大;加样时注意不要产生气泡,气泡会导致吸光度读数偏差。
- 洗板是影响结果重复性的关键步骤:手工洗板时每孔洗液注满后静置30秒再弃去,严格按照说明书要求的洗板次数洗涤,不能减少洗板次数,否则未结合的物质残留会导致背景升高;如果使用洗板机洗板,需要定期维护洗板头,避免堵孔,保证每孔洗涤充分。
- 显色过程需要避光、恒温:一般要求37℃避光显色,温度偏差会影响酶促反应速率,导致结果误差;显色时间不要随意延长或缩短,按照说明书要求时间终止反应。
- 每次实验都需要同时做标准曲线,不能使用之前的标准曲线计算样本浓度,不同批次实验的反应条件会存在微小差异,随板做标准曲线才能保证结果准确。
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