陕西
在细胞培养的所有污染类型中，支原体污染是公认的“头号公敌”。数据显示，全球细胞系支原体污染率高达15%-60%，国内传代细胞的污染率甚至超过57%。更令人头疼的是，支原体污染后培养基不浑浊、细胞不立刻死亡，它像“温水煮青蛙”一样长期与细胞共存，悄悄改变细胞的生长速率、形态、染色体数目和代谢通路，等你发现实验结果无法重复时，可能已经浪费了数月时间和大量经费。
为什么支原体这么难对付？
支原体是目前已知最小的原核生物之一，直径仅0.1-0.3 μm，没有细胞壁，能够轻松通过常规的0.22 μm滤膜。它的折光性极低，普通光学显微镜下根本看不见，且对青霉素等常见抗生素天然耐药，常规的“双抗”对它完全无效。
支原体污染有哪些信号？
当细胞出现不明原因的生长减慢或停滞、贴壁性变差、复苏后存活率降低、染色体核型不稳定等情况时，需要优先排查支原体污染。由于这些变化缺乏特异性，很多实验人员容易误以为是血清批次问题或操作问题，从而耽误了最佳处理时机。
支原体怎么检测？
目前主流的检测方法包括培养法、DNA荧光染色法（DAPI或Hoechst33258染色）、qPCR法和酶联免疫吸附法。其中，培养法和DNA荧光染色法是《中国药典》推荐的法定检测手段，而qPCR法灵敏度最高，仅需几小时即可出结果。建议实验室建立常态化筛查机制，对新引入的细胞株进行隔离检疫，连续两次检测阴性后方可进入常规培养区。
发现污染后怎么办？
如果确认支原体污染，首先要立即隔离可疑细胞，排查同批次细胞、培养基、血清及耗材。对于珍贵细胞，可尝试使用复合型支原体清除试剂进行处理，这类试剂能破坏支原体的脂蛋白膜、干扰其代谢途径，连续处理多代后可能实现清除。但需要注意的是，如果污染已经扩散到培养箱、生物安全柜和细胞房环境，仅靠试剂处理细胞远远不够，必须对整个空间和设备进行彻底消毒。
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