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石蜡切片是病理诊断的金标准与质量基石,高质量的切片能够完整呈现组织形态学特征,为病理诊断提供形态学依据。掌握标准化制片流程、确保切片质量稳定,是保障精准诊断的基础环节。
01
褶皱
原因:组织挤压
解决方案:
1、确保切片前蜡块冷冻充分
2、根据室温和切片速度,每次取适量蜡块切片
3、发现组织不好切或出现挤压时,将蜡块放入冰箱冷冻后再切
原因:气泡
解决方案:
1、组织片边缘轻轻入水可减少气泡
2、捞片时选择没气泡的组织,气泡消失慢的组织镜下也会有皱褶
原因:刀口有残余石蜡或刀口钝化
解决方案:
1、用棉花蘸二甲苯擦拭刀口清除残余石蜡
2、及时更换刀片
原因:组织浸蜡不充分或脱水透明不彻底
解决方案:
1、脱蜡不充分的组织退回重新浸蜡
2、脱水透明不足的标本延长步骤时间后重新包埋
原因:特殊组织(如甲状腺滤泡等)
解决方案:
1、切片时均匀柔和的用力,选择没皱褶的组织裱片
2、裱片水温设置稍低(45-50°C)一点,热水的时间稍微长一点,看到褶皱消失才捞片
02
刀痕和裂痕(纹)
原因:组织中纤维成分较多,有钙化,固定脱水不好的组织
解决方案:
1、及时更换刀口
2、根据自己切片的习惯进行组织包埋(注意包埋方向),从软组织下刀
原因:组织中有异物
解决方案:取材或包埋过程中及时去除异物(如线头、钉子等)
原因:蜡块开裂
解决方案:
1、提高石蜡的韧性:使用切片专用石蜡;加入少量蜂蜡;将石蜡放65度烤箱反复冻融
2、包埋后待蜡块可以轻易的从模具脱出时再取出蜡块,不要用力敲打使其脱出
3、包埋时开一包一,确保组织与石蜡温度尽量一致(组织冷却后包埋与石蜡不相融)
03
气泡和空洞
原因:包埋时混入空气
解决方案:
1、缓慢注蜡并用温热镊子轻压组织排出气泡
2、包埋时轻敲模具排气
原因:浸蜡温度过高产生气泡
解决方案:严格控制浸蜡温度与时间
原因:组织脱水不彻底
解决方案:规范脱水程序,确保脱水彻底
原因:组织冷冻过度
解决方案:适度冷冻,复温,蜡块粗修后再细修(连续切片后面的切片出现空洞的概率会降低)
04
组织脱片碎烂
原因:载玻片未清洁或无粘性
解决方案:使用粘附性强的防脱载玻片
原因:烤片温度过低或时间过短
解决方案:70℃烤片30分钟以上
原因:组织固定脱水不佳
解决方案:
1、延长切片前蜡块冷冻时间
2、增加切片厚度(3-4um),放到水里尽快捞片,不入热水
3、先烤载玻片,切片后直接用加热后的载玻片进行印片
05
污染
原因:取材污染
解决方案:及时清洁取材器具(取材台、刀、镊子等)
原因:包埋污染
解决方案:
1、包埋盒逐个打开,开一包一
2、及时清洁包埋器具(包埋机台面、包埋框和包埋镊等)
原因:切片污染
解决方案:
1、及时清理刀片、刀架、镊子、手套上的蜡屑
2、及时清除裱片水中的剩余组织切片
3、防止静电引起组织飞舞导致的污染
原因:染色污染
解决方案:
1、定期更换染色液
2、镜下观察污染物是漂浮的,可以放二甲苯里洗掉
3、清理盖玻片上组织的污染
来源:“甘肃妇幼 | 省中心医院 病理科”微信公众号
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