AbMole 抑制剂篇丨 AOH1996：靶向 PCNA 的小分子，在肿瘤和DNA复制中的研究应用

AOH1996（AbMole，M40519）是靶向增殖细胞核抗原 PCNA 的小分子工具化合物。PCNA 属于滑动钳蛋白家族，是 DNA 复制叉延伸与 DNA 损伤修复的核心支架，负责招募 DNA 聚合酶、FEN1 核酸酶等大量效应蛋白。研究发现肿瘤细胞中广泛存在一种肿瘤相关 PCNA 异构体（caPCNA），其 L126-Y133 区域构象改变、更易被小分子接近，为选择性干预提供了结构基础。AOH1996 正是针对该区域表面口袋经理性设计获得的优化分子，在动物实验中可经口给药、代谢稳定，为解析 PCNA 依赖的复制与修复网络提供了高特异性化学工具。

分子层面，AOH1996（CAS No.：2089314-64-5）并不直接阻断 PCNA 与 PIP-box 蛋白的结合，而是发挥一种类似分子胶的作用：AOH1996能够增强 PCNA 与 RNA 聚合酶 II 最大亚基 RPB1 的相互作用，促使 PCNA 从活跃转录的染色质区域解离，以转录依赖的方式制造转录－复制冲突（TRC），最终引发 DNA 双链断裂与细胞凋亡。将 RPB1 的 PCNA 结合区进行 Y418A 点突变后，细胞对 AOH1996 产生抵抗，证明AOH1996的生物活性严格依赖 PCNA-RPB1 互作轴。

AOH1996（AbMole，M40519）的在细胞实验中应用广泛。在神经母细胞瘤 SK-N-DZ 细胞中，500 nM 处理 24 h 即可经 TUNEL 检测到显著凋亡，并伴随 caspase-3、caspase-9 激活与 γ-H2AX 信号上升；同等浓度下正常神经嵴干细胞 7SM0032、外周血单个核细胞及乳腺上皮细胞的活力几乎不受影响。DNA 纤维铺展实验显示该分子可减缓复制叉延伸速率；DR-GFP 报告系统显示AOH1996能够选择性抑制同源重组介导的 DNA 双链断裂修复，而不影响末端连接通路。在 SK-N-AS 细胞中导入 RPB1 Y418A 突变后，AOH1996 诱导的 DNA 损伤基本消失，可作为靶点依赖性对照。该分子同样适用于联合干预探究：500 nM AOH1996 与 3 μM 顺铂联用时其联合指数约为0.55，呈现出明显的协同效应。

AOH1996（CAS No.：2089314-64-5）在动物实验中可经口服给药，且代谢稳定，动物实验一般以皮下异种移植瘤模型为主。例如有文献分别接种 SK-N-BE(2)-C 神经母细胞瘤、MDA-MB-468 乳腺癌或 NCI-H82 小细胞肺癌细胞，第 5 天起以 40 mg/kg 每日口服灌胃，给药组肿瘤负荷显著低于溶剂对照组（P<0.01）；免疫组化可见给药组肿瘤内 γ-H2AX 与磷酸化 Chk1 呈现强阳性的结果，提示AOH1996能在动物体内同样诱发 DNA 损伤应答。连续 2 周每日 100 mg/kg 的AOH1996重复给药未引起动物死亡或明显体重下降。药代分析显示小鼠 40 mg/kg 口服给药后，AOH1996的半衰期约 3.5 h。

综上，AOH1996（AbMole，M40519）作为一种靶向 PCNA 的小分子工具化合物，在 DNA 复制应激、转录－复制冲突以及肿瘤细胞选择性杀伤的机制探究中具有独特价值。区别于直接造成 DNA 共价损伤或广泛阻断复制叉的传统工具，它以增强 PCNA-RPB1 异常互作为作用基础，为解析 PCNA 在复制叉稳态与转录偶联修复网络中的生物学功能提供了可靠的体外与动物体内研究工具。

范例详解
Br J Cancer. 2026 Feb;134(4):662-675.
实验人员在该研究中构建了衰老相关基因预后模型 SRGS 预测前列腺癌生化复发风险，确定 PCNA 是驱动前列腺癌进展为去势抵抗型前列腺癌的关键靶点。科研人员使用了AbMole的 AOH1996（AbMole，M40519）作为 PCNA 小分子抑制剂开展小鼠体内外验证，发现 AOH1996 可抑制前列腺癌细胞增殖并诱导凋亡，与恩扎卢胺（Enzalutamide）联用存在协同抗肿瘤效果，能够改善雄激素剥夺治疗抵抗，为去势抵抗前列腺癌提供新的研究思路。

In vitro validation of PCNA as a therapeutic target for pros

* 本文所述均为科研试剂，仅供科学研究参考

参考文献
[1] Gu L, et al. Small molecule targeting of transcription-replication conflict for selective chemotherapy. Cell Chemical Biology, 2023, 30(10): 1235-1247.e6.
[2] Gu L, et al. The anti-cancer activity of a first-in-class small molecule targeting PCNA. Clinical Cancer Research, 2018, 24(23): 6053-6065.
[3] Malkas L H, et al. A cancer-associated PCNA expressed in breast cancer has implications as a potential biomarker. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2006, 103(51): 19472-19477.
[4] Kang H, et al. AOH1996 targets mitochondrial dynamics and metabolism in leukemic stem cells via mitochondrial PCNA inhibition. Experimental Hematology & Oncology, 2024, 13: 123.
[5] Moldovan G L, et al. PCNA, the maestro of the replication fork. Cell, 2007, 129(4): 665-679.
细胞实验参考
细胞系：Primary human CD34+ CD38− acute myeloid leukemia blasts (leukemia stem cell-enriched)
方法：Cell proliferation was assessed by viable cell counting; apoptosis was detected by flow cytometry; colony-forming potential was evaluated via methylcellulose colony-forming assay; fatty acid oxidation level was measured by ³H-palmitate incorporation assay; oxidative phosphorylation capacity was determined by Seahorse extracellular flux analyzer; mitochondrial ultrastructure was observed via transmission electron microscopy; protein expression and interaction were analyzed by Western blotting and immunoprecipitation
浓度：0.5, 1 μM
处理时间：24 h for proliferation, apoptosis, metabolic detection, mitochondrial morphology observation and protein analysis; 14 days for colony formation assay
参考文献：Exp Hematol Oncol. 2024 Dec 28;13:123
上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。
动物实验参考
动物模型：Es1 (ko) SCID mice, human primary acute myeloid leukemia blast-derived xenograft model
配制：The complete solvent composition was not described in original paper
剂量：100 mg/kg
给药处理：Oral gavage, twice daily for 3 consecutive weeks, initiated 7 days after intravenous inoculation of 1.0 × 10⁶ human primary AML blasts
参考文献：Exp Hematol Oncol. 2024 Dec 28;13:123
上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。
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