人可溶性粘附分子(Sam)ELISA Kit
作者:深圳市恒昊生物科技有限公司
什么是人可溶性粘附分子Sam
粘附分子是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间相互粘附结合的跨膜糖蛋白,在免疫应答、炎症反应、伤口愈合、肿瘤转移等诸多生理病理过程中发挥关键作用。而可溶性粘附分子Sam是这类跨膜粘附分子的可溶性片段,由细胞膜表面的完整粘附分子经蛋白酶水解脱落释放,或是通过mRNA可变剪接直接分泌产生,广泛存在于人体的血清、血浆、细胞培养上清、脑脊液等体液中。
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注意事项
想要获得准确稳定的检测结果,除了按照试剂盒说明书操作外,还需要重点关注以下几个方面的问题:
1. 样本处理与保存
- 血清/血浆样本:采集血液后建议尽快分离,血清样本室温放置不超过2小时,血浆样本需使用合适的抗凝剂(EDTA、肝素均可,需避免样本凝固),离心分离后可在2-8℃短期保存(不超过48小时),长期保存需要放置于-20℃或-80℃冰箱,避免反复冻融——反复冻融会导致蛋白质降解,可溶性Sam浓度下降,造成结果偏低。
- 细胞培养上清样本:需离心去除细胞碎片和沉淀,取上清即可检测,如果有悬浮物,需再次离心去除,避免堵塞孔道或非特异性结合。
- 样本复融:冻存样本拿出后需要室温自然复融,复融后轻轻混匀,避免剧烈震荡产生气泡,有沉淀时需要再次离心取上清检测。
2. 试剂准备
- 试剂提前回温:试剂盒从2-8℃冰箱取出后,需要放置在室温(20-25℃)平衡30分钟以上,让试剂温度恢复至室温,否则会因为温度不均导致显色不均匀,影响结果重复性。
- 标准品稀释:稀释标准品时需要充分混匀,逐倍稀释过程中要更换枪头,避免交叉污染,导致标准曲线线性不合格。
- 洗涤液配置:如果浓缩洗涤液放置过程中出现结晶,需要提前水浴加温溶解结晶,再进行稀释,避免盐分浓度不均导致洗板不充分。
- 底物工作液:TMB底物需要避光保存,使用前才打开,避免提前接触空气氧化,若底物变色发黄说明已经失效,需要更换。
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