奶粉中抗坏血酸测定的方法学改进方案：从手工滴定到电位滴定仪永停滴定法

1 前言

维生素C是婴幼儿配方奶粉质量评价的关键指标。现行国标GB 5009.86-2025中的手工滴定法，在奶粉等有色或浑浊基质中终点判定困难，易引入人为误差；荧光法虽准确但操作繁琐，不适于批量快检。

本方案在国标基础上改进为永停滴定法——以2,6-二氯靛酚为滴定剂，通过双铂电极监测电流突跃自动判定终点，不受样品颜色和浊度影响；同时避免了碘滴定法氧化性过强导致结果偏高的问题。该方法操作简便、重复性好，适用于婴幼儿配方乳粉及调制乳粉中抗坏血酸的日常批量检测。

图 1 电位滴定仪外观图

2 仪器与试剂

2.1 仪器

电位滴定仪（带永停滴定功能），双铂电极，分析天平，具塞锥形瓶、容量瓶等玻璃器皿。

2.2 试剂

草酸溶液（20 g/L）：称取草酸20 g，用水溶解并定容至1 L。

2,6-二氯靛酚溶液：称取碳酸氢钠52 mg溶解于200 mL热蒸馏水中，再加入2,6-二氯靛酚50 mg溶解，冷却后用水定容至250 mL，过滤至棕色瓶，于4℃避光保存。

L-抗坏血酸标准品（纯度≥99%）。

L-抗坏血酸标准溶液（1.0 mg/mL）：称取L-抗坏血酸标准品100 mg（精确至0.1 mg），溶于草酸溶液并定容至100 mL，临用现配。

3 实验方法

3.1 试样制备

取代表性奶粉样品约100 g，置于粉碎机中，加入草酸溶液100 g，迅速捣成匀浆。准确称取制备好的匀浆样品10 g~40 g（精确至0.01 g）于锥形瓶中（本方案称取约20 g，相当于试样质量约10 g），用草酸溶液转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀后过滤。弃去初滤液，收集后续滤液备用。

图 2 样品实物图

3.2 2,6-二氯靛酚溶液的标定

准确吸取0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL抗坏血酸标准溶液（1.0 mg/mL），分别置于50 mL锥形瓶中，各加入草酸溶液50 mL，用永停滴定仪以2,6-二氯靛酚溶液滴定，仪器自动记录滴定终点体积。

以抗坏血酸含量（mg）为纵坐标（y），滴定剂体积（mL）为横坐标（x），绘制标准曲线，回归方程：y = 0.0794x - 0.0258。

3.3 样品测定

准确吸取试样滤液10 mL于滴定杯中，加入草酸溶液50 mL，置于永停滴定仪上，插入双铂电极，启动搅拌。用标定过的2,6-二氯靛酚溶液滴定，仪器自动监测电流变化并判定终点，记录消耗体积V。

图 3 滴定过程图

3.4 永停滴定参数设置

4 结果与讨论

4.1 计算公式

将样品滴定消耗体积V代入标准曲线回归方程，查得对应的抗坏血酸质量m_AA（mg），按下式计算样品含量：

式中：X — 试样中还原型抗坏血酸的含量，mg/100g；m_AA — 由标准曲线查得的10 mL滤液中抗坏血酸的质量，mg；A — 稀释倍数（100 mL / 10 mL = 10）；m — 试样质量，g；100 — 换算为每百克的系数。

空白试验中永停滴定无电流突跃，无法获得有效空白体积，故不进行空白校正，标准曲线法已扣除试剂本底影响。

若滴定剂浓度稳定，可采用两点法（0.5 mg和2.0 mg）简化标定，但建议定期（每周或更换试剂时）多点标定以确保准确性。

4.2 测试结果

注：滴定剂与抗坏血酸线性关系为：y=0.0794x-0.0258（y：抗坏血酸含量，mg；x：滴定剂体积，mL）

4.3 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%，符合GB 5009.86-2025要求。

4.4 方法比对

采用GB 5009.86-2025中第三法手工滴定法对同批次样品进行比对测定：

比对结果表明，永停滴定法结果较手工法偏高约2%。两种方法终点判定原理不同，手工法依赖颜色变化（粉红色出现），其变色范围与化学计量点存在差异；永停法则直接反映化学反应计量点，偏差属正常现象，在可接受范围内。

5 方案特点与优势

5.1 方法优势

终点判定客观：永停滴定通过电流突跃自动识别终点，消除目视判断的主观差异，有效解决奶粉等有色或浑浊样品终点辨识困难的问题。

选择性优良：选用2,6-二氯靛酚为滴定剂，氧化能力适中，能够选择性氧化还原型抗坏血酸，避免碘滴定法因氧化过强导致结果偏高。

自动化程度高：仪器全程控制滴定、终点识别及体积记录，减少人为操作误差，提升数据可溯源性。

重复性好：三次平行测定结果离散度小（调制乳粉RSD=0.46%，婴儿配方奶粉RSD=0.33%），满足国标精密度要求。

无需空白校正：采用标准曲线法定量，规避永停滴定在空白体系中无电流突跃的问题，流程更顺畅。

5.2 适用场景

适用于婴幼儿配方乳粉、调制乳粉及其他乳制品中抗坏血酸的含量监控。通过调整称样量可覆盖不同浓度水平样品。前处理仅需酸性提取后直接滴定，无需复杂净化步骤，适于日常质控实验室的连续分析。

5.3 操作要点

全程避光操作，防止抗坏血酸光解；

标准溶液及滴定剂临用现配，避免分解；

奶粉样品充分混匀后称量，保证取样代表性；

双铂电极使用后及时清洗，维护响应灵敏度。

6 结论

本方案将GB 5009.86-2025中的手工2,6-二氯靛酚滴定改进为永停滴定法。实验表明，以2,6-二氯靛酚为滴定剂，通过双铂电极监测电流突跃自动判定终点，操作简便、结果准确可靠，有效弥补了电位滴定终点跃迁不明显及碘滴定选择性差、结果偏高的不足。该方法适用于调制乳粉、婴幼儿配方奶粉等乳制品的批量检测，可为产品质量控制提供可靠的技术支持。

7 参考文献

[1] GB 5009.86-2025 食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定[S].

本文档为通用技术方案，具体仪器操作请参考对应设备说明书。