湖北
基因编辑技术的突破为生命科学研究与生物产业升级提供了革命性工具,其中CRISPR/Cas系统凭借精准靶向、操作高效、适配性广等优势，已成为水生动物遗传改良与模型构建的核心技术支撑。水生动物作为水产养殖产业的核心载体、生态系统的关键组成部分，以及生物医学研究的重要模式生物，其生长性能、抗病抗逆能力、经济性状等的定向改良，对保障粮食安全、推动水产种业升级、深化生命科学研究具有重要意义。传统育种方式存在周期长、改良性状不确定等局限，而CRISPR/Cas12介导的基因编辑技术可实现特定基因的精准敲除与修饰，快速培育出具有优良性状的水生生物品系，大幅缩短育种周期、提升改良效率。武汉尚睿生物提供水生生物基因编辑服务，利用CRISPR/Cas12技术快速构建基因敲除水生生物模型。
武汉尚睿生物依托 CRISPR/Cas12 核心技术，构建了覆盖水生动物基因编辑全流程的专业服务体系，从基因信息分析、sgRNA 设计筛选，到受精卵活性验证、稳定遗传品系培育（F0 代至 F1 代），再到遗传与性状稳定的基因编辑品系建立，形成了标准化、模块化的服务流程。服务适配斑马鱼及多种非斑马鱼水生动物，明确了各环节的服务周期、交付标准与成本预算，既满足科研机构的模型构建需求，也适配水产种业企业的品种改良诉求。本文将详细呈现服务的完整流程与核心参数，为客户提供清晰、可落地的基因编辑解决方案，助力推动水生生物领域的技术创新与产业转化。
一、基因信息分析及SgRNA设计（4个工作日）
1.根据给定GeneID或Gene name，分析基因结构及功能，寻找保守结构域，在保守结构域或客户指定区域设计靶点，进行生物信息学分析。
2. 通过生物信息学分析目标基因（如生长激素基因、免疫相关基因）的保守区域，设计5-10条 sgRNA 靶点。
3.利用软件预测（如 CHOPCHOP）评估靶点效率与脱靶风险。
二、SgRNA合成及体外筛选（15个工作日）
1.基因组 DNA模板制备，设计鉴定基因编辑结果的PCR引物对。
2.合成并制备5-10条sgRNA，并利用体外切割实验评估sgRNA的切割效率，筛选出高编辑活性的sgRNA。
三、受精卵SgRNA活性验证（30个工作日）
1.优选的5条sgRNA分别和Cas12a共注射受精卵，使基因产生移码突变。
注：若服务品种为非斑马鱼，需客户自行准备鱼卵，在现场产卵1小时内注射完成。且注射后需要客户自行孵化养殖。
2.待胚胎发育后，取部分提取基因组DNA模板，通过PCR扩增并送测序，筛选出活性高的sgRNA。
四、稳定遗传F0代品系培育（60个工作日-根据鱼成熟周期决定）
1. 将上述经过验证有活性的sgRNA和Cas12蛋白混合后，按上述相同的方法显微注入受精卵。然后将按常规饲养，当生长至两月龄时，剪去尾鳍，扩增目标基因组DNA片段。将获得的PCR产物直接送测序，确认体细胞被基因编辑。然后将鱼卵饲养至性成熟，共获得约50尾后代。得到稳定遗传F0代品系。
五、培育F1代突变体（150个工作日-根据鱼成熟周期决定）
1.收取F0自交的胚胎，获得不少于100尾以上的F1。将F1按常规饲养至2个月时，选取10尾鱼，剪尾鳍，进行基因型鉴定。再以引物对F-gene和R-gene进行PCR扩增。将PCR产物直接送测序，通过直接读测序的色谱图，确认每一尾鱼是否成功被基因编辑。
六、基因编辑品系的建立
遗传稳定性测试：选育2-3代，验证编辑位点性状的稳定性
性状稳定性测试：选育2-3代，在室内和野外验证所改良性状的稳定性，如：快速生长、抗病、抗逆等性状。
生动物基因编辑技术服务项目
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