上海
明暗箱（LDB）是基于啮齿类趋暗避明本能的低应激焦虑筛查范式，应激、厌食模型常同时存在焦虑升高与探索欲望下降，传统方法仅统计穿梭次数与亮箱时长，极易将“不敢进亮区（焦虑）”与“不爱活动（动机低下）”混淆。本文采用停留时长占比、首次亮箱潜伏期、跨区犹豫行为分层统计的改良方案，可精准剥离运动及探索基线干扰，特异性评价情绪性焦虑表型。
一、范式核心原理
明暗箱由透光亮区与避光暗区组成，小鼠先天偏好黑暗遮蔽环境，但同时具备探索陌生区域的本能，形成天然趋避冲突。
健康小鼠会反复穿梭两区、探索均衡；焦虑样小鼠长期滞留暗区、回避亮环境；探索动机低下小鼠整体穿梭频次减少，但无明显亮区回避偏向。
相较于高架十字迷宫，明暗箱应激强度更低、无高空恐惧干扰，适合作为行为学电池的首轮焦虑初筛实验，尤其适用于轻度慢性应激及厌食亚临床模型的弱表型检出。
二、标准化前期准备
明暗箱体分为等体积亮、暗两区，中间设统一通行小门；亮区光照稳定维持550 lux，暗区完全遮光，无杂散光干扰。
大小鼠明暗箱分析系统，XR-XB120，上海欣软
实验环境静音、恒温22±1 ℃。小鼠提前30 min移入行为室适应环境，消除转运应激。雌雄分批次检测，雌性同步记录动情周期。
整套行为学排序中将明暗箱置于首位，作为基础情绪基线检测，避免前期应激残留干扰焦虑表型。每只测试结束使用75%酒精擦拭箱体，彻底清除气味线索，风干后再进行下一样本检测。
三、改良标准化测试流程
总测试时长5 min，统一将小鼠头部朝向亮区、放置于明暗交界口，即刻启动录像计时。
可采用视觉精细化行为判定，区分三类行为状态：亮区主动探索、交界犹豫滞留、暗区静止避险。
有效跨区判定以四肢完全进入对应区域为准，仅探头张望不计入跨区次数。全程人员远离箱体，禁止走动、俯视，避免外源刺激加剧小鼠避险行为。
四、多维指标联合判读
核心统计指标包括：
亮区停留时长占比、明暗区穿梭总次数、首次进入亮区潜伏期、交界区犹豫时长。
特异性焦虑表型判定标准：穿梭总次数无显著下降（探索运动能力正常），但亮区停留占比降低、首次亮区潜伏期延长、交界犹豫时间增加，提示为情绪介导的亮环境回避。
若穿梭次数整体降低且无明暗偏向，则判定为自发活动与探索动机下降，不属于特异性焦虑。该校正逻辑可完美解决厌食模型体能偏弱、多动/少动混杂带来的假阳性问题。
五、实操误差规避要点
明暗两区漏光、光照梯度不标准，会弱化趋避冲突；放置小鼠位置不统一，导致初始行为基线偏差；
仅统计穿梭次数忽略停留占比，无法区分焦虑与动机低下；
单只间气味残留会使小鼠持续紧绷、全程躲暗区。严格统一光照参数、放置位点与分层统计标准，可显著提升实验灵敏度与组间区分度。
参考文献
1. Crawley J N. Exploratory behavior models of anxiety in mice[J]. Neuroscience & Biobehavioral Reviews, 1985, 9(1):37-44.
2. Bourin M, Hascoët M. The light/dark test in mice[J]. European Journal of Pharmacology, 2005, 523(1-3):111-119.
3. 李杉, 等. 改良明暗箱实验优化小鼠焦虑表型与探索动机区分方法[J]. 中国比较医学杂志, 2023, 33(6):94-99.
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