产品名称:异硫氰酸荧光素标记溶菌酶,FITC-Lysozyme 的理化特性
一、基础分子组成与外观性状
组分构成
由天然溶菌酶(Lysozyme,约 14.3 kDa 碱性蛋白)与 FITC(异硫氰酸荧光素)通过硫脲键共价偶联而成;FITC 与蛋白赖氨酸侧链氨基结合,无游离染料残留,产品透析纯化去除未反应小分子。
外观
橙黄色至黄绿色冻干粉末;水溶液呈明亮黄绿色澄清液体,无肉眼可见沉淀。
溶解性
较易溶于纯水、中性 PBS、HEPES 缓冲液;不溶于氯仿、二氯甲烷等纯有机溶剂;高浓度乙腈、丙酮会引发蛋白变性析出。
电荷特性
溶菌酶本身等电点 pI≈11.0,呈强阳离子蛋白;FITC 含羧基,标记后引入负电荷,标记度越高,产物等电点小幅下降,中性 pH 下仍带弱正电,保留阳离子吸附特性。
二、光谱荧光理化特性
标准光谱参数
较大激发波长 Ex=488–492 nm,较大发射 Em=518–525 nm,适配共聚焦 488 nm、流式绿色荧光通道;摩尔消光系数高,荧光信号灵敏。
pH 依赖荧光响应
pH 7.0–9.0(血液、细胞培养基):FITC 羧基解离,荧光量子产率高,信号稳定;
pH 4.0–6.0(溶酶体、酸性病灶):FITC 质子化,荧光明显淬灭,可用于区分胞内酸性囊泡;
pH<3 或 pH>11:荧光基团不可逆破坏,永久失光。
光稳定性
FITC 抗光漂白性能一般,长时间紫外 / 激光照射会发生光氧化,荧光不可逆衰减;全程避光操作可大幅延长观测时长。
标记度(F/P 值)理化影响
常规产品 F/P=2–6;F/P 过低荧光信号弱;F/P 过高会造成染料分子堆叠,发生分子内自猝灭,同时降低溶菌酶天然酶活。
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三、蛋白生化理化特性
酶活保留特性
温和偶联条件下,标记产物保留溶菌酶溶菌活性:可裂解革兰氏阳性菌肽聚糖,破坏细菌细胞壁;高 F/P、强碱性高温标记会破坏酶活性中心,抑菌活性显著下降。
温度稳定性
4℃短期存放蛋白稳定;
>55℃加热易发生蛋白变性,出现浑浊沉淀,同时 FITC 染料脱落;
反复冻融导致蛋白解折叠、荧光泄漏、酶活丢失。
缓冲盐耐受性
耐受 0–300 mM NaCl,高盐仅轻微压缩水化层,无沉淀;高浓度磷酸盐、硫酸盐长时间放置易轻微聚集;Tris 缓冲液中游离氨基会缓慢置换、剥离部分 FITC,造成背景升高。
蛋白酶抗性
游离蛋白酶(胰蛋白酶、蛋白酶 K)可降解溶菌酶骨架,荧光小分子片段扩散,荧光由点状变为弥散状,可用于蛋白胞内降解示踪。
状态:固体/粉末/溶液
保存:冷藏
供应:西安齐岳生物科技有限公司
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