中科院1区_中药复方1区Top: 安徽中医药大学附属医院等团队揭示芪藤消浊颗粒激活自噬缓解慢性肾小球肾炎

【写在前面】：本期推荐的是由安徽中医药大学附属医院芜湖中医院科研部、安徽中医药大学附属第一医院药学部、安徽医科大学巢湖医院药学部等研究团队合作近期发表于Phytomedicine(IF11.3）的一篇文章，揭示芪藤消浊颗粒激活自噬缓解慢性肾小球肾炎。

【期刊简介】

【题目及作者信息】

Qiteng xiaozhuo granules activate mitophagy to alleviate chronic glomerulonephritis

背景

芪藤消浊颗粒（QTXZG）是一种中药方剂，因其疗效而得到广泛认可。先前的研究表明，甲基转移酶样3（METTL3）/FOS样抗原1（FOSL1）N6甲基腺苷（m6A）轴在体外和体内慢性肾小球肾炎（CGN）的自噬调节中起着至关重要的作用。然而，尚不清楚QTXZG是否通过METTL3/FOSL1 m6A轴调节有丝分裂吞噬在CGN中发挥治疗作用。本研究旨在通过METTL3/FOSL1 m6A轴激活肾小球系膜细胞的有丝分裂吞噬，探讨QTXZG的肾脏保护机制。

方法

分别采用腺嘌呤诱导的CGN小鼠和脂多糖刺激的小鼠肾小球系膜细胞作为体内和体外模型。采用高效液相色谱指纹图谱、峰分配、标记物定量和分析方法验证对QTXZG进行了化学表征和质量控制。通过血清肌酐、血尿素氮、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M定量评估肾功能。使用苏木精和曙红、Masson和过碘酸希夫染色分析肾脏组织病理学。通过细胞计数kit-8试验优化含QTXZG的血清浓度和治疗时间。通过酶联免疫吸附试验和活性氧染色评估炎症和氧化应激。通过比色法定量全球m6A水平，并通过甲基化RNA免疫沉淀定量PCR验证FOSL1 mRNA m6A修饰。放线菌素D实验测定FOSL1 mRNA的稳定性。通过蛋白质印迹、透射电子显微镜、MitoTracker Red染色和微管相关蛋白1轻链3-线粒体免疫荧光共定位分析METTL3/FOSL1 m6A轴和线粒体吞噬。

结果

10批QTXZG的高效液相色谱指纹图谱鉴定出16个共有峰，将其分配给相应的草药来源，并定量了5个代表性标记化合物。QTXZG改善了CGN小鼠的肾功能，抑制了系膜细胞增殖，同时降低了促炎细胞因子和活性氧水平，增强了超氧化物歧化酶活性。重要的是，QTXZG促进了自噬体的形成并减轻了线粒体损伤，增强了微管相关蛋白1轻链3-线粒体/电压依赖性阴离子通道1的共定位，证实了线粒体吞噬诱导。从机制上讲，QTXZG抑制了METTL3/FOSL1的表达，降低了整体m6A水平和FOSL1 mRNA m6A富集，并破坏了FOSL1转录本的稳定性。关键的是，METTL3过表达逆转了QTXZG对脂多糖刺激的小鼠肾小球系膜细胞中炎症、氧化应激、自噬和METTL3/FOSL1 m6A轴的影响。

结论

本研究表明，QTXZG通过调节METTL3/FOSL1 m6A轴诱导CGN肾小球系膜细胞的自噬。通过写入酶METTL3靶向FOSL1 m6A修饰可能为CGN的治疗提供一种潜在的治疗方法。

图文摘要

【前言】

慢性肾小球肾炎（CGN）是一种由免疫介导的炎症驱动的进行性肾小球疾病，表现为蛋白尿、血尿和高血压，通常进展为慢性肾病。虽然其发病机制尚不完全清楚，但免疫失调起着核心作用。目前的疗法（糖皮质激素、免疫抑制剂、血管紧张素转换酶抑制剂/血管紧张素受体阻滞剂）旨在减缓肾脏衰退，但面临不良反应和疗效可变的限制，通常导致终末期肾病。阐明CGN机制和开发靶向治疗仍然是至关重要的研究重点。

芪藤消浊颗粒（QTXZG），一种标准化的草药制剂，含有七种药用成分——黄芪、益母草、益益仁、白花蛇舌草、白毛根、蝉蜕和雷公藤，通过其健脾、化瘀、排毒和改善肾脏参数的作用，在临床实践中对CGN管理进行了实证验证。虽然其临床疗效有据可查，但其治疗作用的分子基础仍有待充分阐明。我们之前的蛋白质组学分析强调了线粒体吞噬是QTXZG肾脏保护作用的关键机制。随后结合血清药物化学和网络药理学的综合分析确定，自噬和AMP激活的蛋白激酶/雷帕霉素机制靶点（AMPK/mTOR）信号通路是QTXZG生物活性成分的关键靶点。基于这些发现，我们假设QTXZG通过调节METTL3/FOSL1 m6A轴来增强肾小球系膜细胞的有丝分裂吞噬，从而抵消CGN的进展，从而发挥其治疗作用。

为了验证上述假设，本研究采用腺嘌呤诱导的CGN小鼠和脂多糖（LPS）刺激的小鼠肾小球系膜细胞（MGMCs）的体内和体外模型，研究QTXZG对METTL3/FOSL1 m6A轴以及MGMCs炎症、氧化应激和自噬水平的影响。从RNA表观遗传学的角度，进行了功能和机制拯救实验，以确定QTXZG治疗CGN的治疗机制。本研究旨在评估QTXZG作为一种治疗慢性肾小球肾炎的多草药植物制剂，并阐明其肾脏保护作用是否与通过METTL3/FOSL1 m6A轴的自噬激活有关。

【结果部分】

1.QTXZG 的化学表征与质量控制。

2.QTXZG 对 CGN 小鼠组织病理学及肾功能的治疗作用。

3.含 QTXZG 血清对LPS刺激的MGMCs中炎症反应及氧化应激的影响。

4.QTXZG 对 CGN 小鼠肾脏线粒体自噬的影响。

5.含 QTXZG血清对LPS刺激的MGMCs中线粒体自噬的影响。

6.QTXZG 在体内和体外均能调控METTL3/FOSL1的m6A修饰轴。

7.METTL3的过表达可逆转LPS刺激的MGMCs中 QTXZG 介导的保护作用。

8.METTL3过表达可逆转LPS刺激的MGMCs中 QTXZG 诱导的线粒体自噬。

9.METTL3过表达可逆转LPS刺激的MGMCs中 QTXZG 介导的METTL3/FOSL1 m6A轴调控。

10.示意图展示 QTXZG 在 CGN 中调控MGMCs内METTL3 / FOSL1 m6A线粒体自噬轴的作用机制。

【结论与讨论】

本研究采用体内和体外模型相结合的综合方法，阐明QTXZG通过METTL3/FOSL1 m6A自噬轴治疗CGN的分子机制。我们的研究结果揭示了QTXZG缓解CGN的新机制，并表明靶向METTL3/FOSL1 m6A自噬轴可以为CGN提供新的治疗策略。这些结果为QTXZG的临床应用提供了关键证据，并开辟了一条新的途径。

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