上海
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细胞转染技术在CGT开发中扮演着重要角色。为提高转染效率和病毒包装产量，研究者们需要对转染工艺中的多个参数进行优化。上篇文章曼博生物已从细胞转染的培养基选择、培养空间与体积、细胞质量与状态、细胞密度，以及质粒DNA的质量与用量角度提出了5个优化关键点，本篇文章将继续为大家带来其他优化转染的实践指南。
首先是质粒比例。对于AAV包装，载体质粒：复制&包装质粒：转移目标基因的初始建议质粒比例为2:1.5:1。
其次，PEI与质粒DNA的比例直接影响复合体的稳定性，建议从2:1开始优化。
同时，孵育体积影响质粒DNA与PEI复合体的形成和与细胞的有效接触。建议孵育体积维持在总培养体积的5%-10%。
对于孵育方式与时间，推荐采用AB液的形式，即分别配置质粒DNA溶液和PEI溶液，然后将PEI溶液加入质粒DNA溶液中。孵育时间建议控制在10-20分钟。
最后，由于病毒颗粒的收获时间影响病毒滴度，因此建议慢病毒在转染后48小时收获，AAV病毒在转染后72小时收获。
细胞转染的成功依赖于对多个参数的严格优化，希望这两篇PEI转染试剂关键参数的分享能为科研伙伴提供实用的参考，如有需要欢迎咨询曼博生物。
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