上海
核酸递送是生物学研究、转基因和基因治疗的重要环节。由于核酸酶的普遍存在和核酸的高分子量特性，外源核酸很难独立进入靶细胞，且易被溶酶体降解。因此，开发有效的核酸运载体是关键。PEI作为一种核酸运载体，已被应用于细胞转染。然而，转染效率和病毒包装产量受多种因素的影响，曼博生物将从分两期文章为各位科研伙伴讲解细胞转染优化的关键方向。
首先是培养基的选择，无血清培养基在转染过程中具有较大优势，能够支持高密度细胞生长且不影响转染效果。血清的质量和用量也需重视。建议在无血清或低血清（2%-5%）条件下进行转染，以避免血清中的蛋白因子干扰质粒DNA与PEI的结合。
第二，培养空间与体积。建议在小体积模型中进行条件摸索，选择合适的培养体积以达到更佳生产效果。对于总容量小于500ml的摇瓶，培养总体积不超过20%；对于总容量大于500ml的摇瓶，培养总体积不超过30%。
第三，细胞质量与状态。要选用处于对数生长期、活力高、代次低（30代以内）的细胞进行转染，可获得更佳效果。细胞汇合度和传代次数也会影响转染效率，建议使用低代次细胞以确保基因型不变。
第四，细胞密度。建议维持在1~2×10^6/ml，也可尝试高密度（如5×10^6/ml）以优化转染效果。
同时，也需关注质粒DNA的质量与用量。质粒纯度应满足A260/A280值在1.8左右，且内毒素需清除干净。质粒用量需根据细胞数量和转染试剂的要求进行调整，一般为1~2μg/ 1×10^6细胞。
以上为曼博生物分享的关于细胞转染的部分优化方向，下期将继续为大家带来更多转染实践指南。
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