药品车间：纯化水Bc洋葱伯克霍尔德菌属不可接受微生物关键因素

引言

在制药行业，纯化水作为关键的生产原料，其质量直接关系到药品的安全性和有效性。随着2025版中国药典的发布，对制药过程中纯化水的微生物限度及不可接受微生物的检测提出了更为严格的要求。本文旨在系统阐述制药药物生产过程和制剂制备中纯化水的微生物限度标准、不可接受微生物的检测周期与取样点确定方法，深入探讨制药纯化水系统中不可接受微生物及生物膜的监测、行动限与警戒限设定，分析微生物监测中OOS（检验结果偏差）超标的处理与分析流程，并针对药厂纯化水系统预防生物膜形成的控制措施及生物膜去除策略提出具体建议。最后，重点介绍奥克泰士专项纯化水系统生物膜及不可接受微生物解决方案，为药厂提供科学、有效的微生物控制参考。

其中，洋葱伯克霍尔德菌群（Bcc）污染因其潜在的危害，成为重点关注对象。本文通过一个生物药品案例，详细剖析纯化水系统 Bcc 污染的情况、治理流程以及最终解决方案，希望能为相关行业从业者提供宝贵的经验借鉴。

一、不可接受微生物的检测周期与取样点确定

（一）检测周期的设定原则

不可接受微生物的检测周期应根据纯化水系统的运行状况、历史微生物污染数据、生产工艺要求及药典规定等因素综合确定。一般来说，对于新建或改造后的纯化水系统，应在系统验证阶段增加检测频率，以充分了解系统的微生物污染状况。在系统稳定运行后，可根据实际情况适当调整检测周期，但应确保能够及时发现微生物污染问题。

（二）常见检测周期示例

1. 日常监测：对于关键生产环节使用的纯化水，建议每日进行微生物限度检测，以确保生产用水的质量。
2. 周期性全面检测：除日常监测外，还应定期（如每周、每月）对纯化水系统进行全面检测，包括需氧菌总数及不可接受微生物的检测。
3. 特殊情况下的检测：在系统维修、更换关键部件或发生微生物污染事件后，应立即增加检测频率，直至系统微生物污染状况得到稳定控制。

（三）制药用水系统取样点的选择 确定

基于系统设计与风险分布

取样点应能够反映纯化水系统各个环节的质量状况，包括进水、处理单元、储存和分配系统以及使用点。制药用水系统中的质量控制也需要考虑水流的体积流量和污染物浓度。水从水源进入纯化水系统，经过各个处理环节，再通过分配系统输送到各使用点，整个过程中水的“停留时间分布”会影响取样点检测结果的代表性。

取样点的选择应遵循代表性、可操作性和风险导向的原则。具体来说，应考虑纯化水系统的工艺流程、水流方向、使用点分布及微生物污染风险等因素。

1. 代表性取样点：应覆盖纯化水系统的各个关键环节，包括原水进口、预处理单元、RO反渗透制备单元、储存与分配系统等。
2. 可操作性取样点：取样点应便于操作，避免对生产过程造成干扰。同时，应确保取样过程的安全性和卫生性。
3. 风险导向取样点：对于微生物污染风险较高的环节或使用点，应增加取样频率或设置专门的取样点。例如，在纯化水系统的末端使用点或靠近生产设备的取样点，应作为重点监测对象。

例如：纯化水系统关键控制点（CCPs）的确定

应根据纯化水系统的工艺流程图和风险评估结果，确定关键控制点。这些点通常包括：

• 原水入口
• ：监测原水质量，确保符合预处理要求。
• 各处理单元出口
• ：如反渗透（RO）膜、离子交换柱、超滤器等处理单元的出口，以评估各单元的去除效率。
• 储存罐
• ：监测储存期间的纯化水质量，特别是微生物生长情况。
• 分配系统环路
• ：在循环分配系统中，应设置多个取样点，包括主循环管道的起始点、中间点和末端，以评估整个分配系统的水质均匀性。
• 各使用点
• ：这是最重要的取样点之一，应确保药品生产线实际使用的纯化水符合质量要求。对于可能存在高风险的使用点（例如无菌制剂的配液点），应加密取样。

二、制药纯化水系统不可接受微生物及生物膜监测

（一）不可接受微生物的监测方法

不可接受微生物的监测通常采用特定的培养基和培养条件进行选择性培养。例如，对于Bcc菌株的监测，可采用洋葱伯克霍尔德菌选择性培养基（如BCYE培养基）进行培养，并通过特定的生化试验进行鉴定。对于罗尔斯通菌的监测，则可采用相应的选择性培养基和鉴定方法。

（二）生物膜的监测方法

生物膜是微生物在纯化水系统表面形成的一层粘附性物质，难以通过常规的清洗消毒方法去除。生物膜的监测可采用多种方法，包括直接观察法、微生物计数法、生物化学指标法等。其中，微生物计数法是最常用的方法之一，通过采集生物膜样本并进行微生物培养计数，评估生物膜的污染程度。

生物膜可以通过结晶紫染色法 ATP荧光检测法电子扫描显微镜或激光共聚焦显微镜等方法进行检测，但这些方式是建立在已经取得或者可以接触到的疑似生物膜组织的前提下才能进行。

对于封闭的水系统，需要通过定量检测数据的对比才能判定生物膜是否存在。

（三）行动限与警戒限的设定

行动限和警戒限是微生物监测中的重要概念，用于指导药厂对微生物污染状况进行及时响应和处理。

1. 行动限：当微生物监测结果超过行动限时，表明纯化水系统可能存在严重的微生物污染问题，需要立即采取措施进行调查和处理。行动限的设定应根据药典要求、生产工艺要求及历史微生物污染数据等因素综合确定。
2. 警戒限：警戒限是微生物污染状况的早期预警指标，当监测结果超过警戒限时，虽然不一定需要立即采取紧急措施，但应引起药厂的关注，并加强监测频率和力度，以便及时发现并处理潜在的微生物污染问题。

三、制药纯化水系统微生物监测中OOS超标的处理与分析

（一）OOS超标的定义与分类

OOS（Out of Specification）超标是指微生物监测结果超出药典规定或企业内部质量控制标准的范围。根据超标的原因和性质，OOS超标可分为实验室误差、生产过程异常及偶然因素等类型。

（二）OOS超标的处理流程

1. 初步调查：当发现OOS超标时，应立即进行初步调查，确认监测结果的准确性及超标原因的可能性。
2. 详细调查
3. ：在初步调查的基础上，进行详细调查，包括回顾生产过程、检查设备状况、分析原材料质量等，以确定超标的具体原因。
4. 采取措施：根据调查结果，采取相应的措施进行处理。如属于实验室误差，应重新进行监测；如属于生产过程异常，应调整生产工艺或加强设备维护；如属于偶然因素，应加强监测频率和力度，以便及时发现并处理类似问题。
5. 记录与报告：对OOS超标的处理过程进行详细记录，并向相关部门报告处理结果和改进措施。

（三）OOS超标的分析方法

1. 趋势分析：通过对历史微生物监测数据进行趋势分析，了解微生物污染状况的变化趋势，为制定预防措施提供依据。
2. 根本原因分析：采用根本原因分析方法（如5Why分析法、鱼骨图等），深入挖掘OOS超标的根本原因，为制定有效的改进措施提供支持。
3. 采用5Why或鱼骨图等工具进行根因分析。例如，某药厂纯化水系统中检出洋葱伯克霍尔德氏菌（BCC），经分析发现：

• Why 1
• ：BCC检出，且近期消毒后仍复发。
• Why 2
• ：消毒剂仅用巴氏消毒，无法穿透生物膜。
• Why 3
• ：消毒程序未规定生物膜专项处理。
• Root Cause
• ：传统消毒方式对BCC生物膜无效。

1. 风险评估：对OOS超标可能带来的风险进行评估，包括对产品质量的影响、对生产过程的干扰等，以便制定相应的风险控制措施。

四、奥克泰士案例分析：生物药品制药用水RO反渗透和储配系统定性检出BCC的排查与去除

4.1案例背景

制药企业的纯化水系统在进行Bcc检测时，发现二级RO产水和储配系统均有检出，而需氧菌总数正常。这一结果引起了企业的高度重视，因为Bcc是一种具有强耐药性、易形成生物膜的微生物，一旦污染可能导致药品变质、患者感染甚至大规模召回。

纯化水系统系统工艺概况：案例中的纯化水系统采用二级反渗透工艺，且无后处理（无EDI），储配系统也没有配备紫外线杀菌装置。二级反渗透工艺能在一定程度上去除水中的杂质和微生物，但缺乏后续的深度处理和杀菌环节，使得系统在面对Bcc这类顽固微生物时，存在一定的污染风险。

4.2污染情况

药企在对该纯化水系统进行常规检测时，发现需氧菌总数处于正常范围，但在对用水点进行第一次Bcc检测时，结果却令人担忧——所有用水点均检出Bcc。这一情况表明，系统中存在Bcc污染，且已经扩散到了各个用水环节。遇到这种情况往往不知道污染原因，也不知道如何进行彻底解决。这种污染的控制难度甚至高于严重的需氧菌总数超标。

4.3治理流程与方案

（一）基本情况评估

面对这一污染状况，首先进行的是基本情况评估。通过取样检测和溯源来确定污染的范围和可能的原因。取样点覆盖全系统，重点包括反渗透系统，同时为了避免取样管污染造成的“虚假污染”以及微生物分布不均造成的偏差，进行了多次、多时间点的取样。然而，目前仅确定终端纯化水污染，但无法确定污染原因，不具备直接开展治理行动的条件。这一步骤至关重要，只有准确了解污染情况，才能制定出有效的治理方案。

（二）结果反馈与初步分析

对一级RO和二级RO进行检测后，结果有新的发现：中间水箱未检出Bcc，而二级RO产水有检出。这表明二级反渗透系统极大可能被污染，但由于无法确定膜元件状况，不能明确污染的具体程度。同时，储配系统也存在极高风险被污染，疑似存在生物膜。生物膜是微生物在物体表面形成的一种复杂结构，它能为微生物提供保护，使其对消毒剂等具有更强的抵抗力，是治理过程中的一大难题。

（三）第一阶段治理方案实施

基于上述分析，制定第一阶段治理方案。对二级反渗透系统进行深度系统化消毒，采用离线方式，使用奥克·泰士除生物膜消毒剂进行处理。奥克`泰士专业高效的消毒剂，能够有效去除生物膜并杀灭Bcc等微生物。同时，对储配系统也进行去生物膜消毒处理。这两者可以同步进行，也可以先进行二级反渗透系统的消毒，再进行储配系统的消毒。

（四）第一阶段治理结果反馈

经过奥`克`泰·士除生物膜消毒剂第一阶段的治理，二级反渗透产水恢复正常，未再检出Bcc，这表明膜元件正常，可继续使用。然而，用水点仍然有Bcc检出，但检出率有明显下降。这说明治理取得一定的效果，但问题尚未完全解决，可能存在其他污染源或消毒盲区。

（五）奥克·泰士工程师远程，沟通排查与逻辑分析

为了找出剩余污染的原因，进行了进一步的排查和逻辑分析。较大可能存在消毒盲区，经沟通和排查，发现两处问题：一是二级反渗透膜连接管未消毒；二是纯水罐喷淋疑似存在盲区。这两处盲区为Bcc的残留和滋生提供条件，导致用水点仍然能检出该菌。

（六）第二阶段治理行动

针对发现的消毒盲区，制定了第二阶段治理方案。对两处盲区进行消毒处理，同时对储配系统再次进行消毒。这次消毒更加全面和细致，确保每一个可能存在微生物的角落都被覆盖到。

（七）第二阶段治理结果反馈

经过使用奥 克 泰 士第二阶段的治理，用水点未再检出Bcc，这表明治理取得了成功，系统中的Bcc污染得到了有效控制。

(八）后续管控措施制订

为了防止Bcc污染再次发生，参考相关控制策略制订了后续管控措施。包括进行覆盖全系统的检测，定期对纯化水系统的各个环节进行微生物检测，及时发现潜在的污染问题；采取有效的维护措施，如定期对系统进行清洁和消毒，更换老化的部件等，确保系统的正常运行和微生物控制效果。

（九）系统后续状况

在实施了上述治理方案和后续管控措施后，对该纯化水系统进行了长时间监测。结果显示，本纯化水系统需氧菌总数一般在10之内波动，未再检出Bcc。这表明系统已经恢复了稳定的质量状态，能够为生产提供符合要求的纯化水。

通过这个实际案例，我们可以看到纯化水系统 Bcc 污染的治理并非一蹴而就，需要全面的评估、细致的检测、合理的分析以及针对性的治理方案。从最初的污染发现，到逐步排查污染源头，再到分阶段实施治理措施，每个环节都紧密相连，缺一不可。同时，后续的管控措施也至关重要，是维持系统稳定运行，防止污染再次发生的关键。奥克泰士希望通过这个案例能为其他面临类似问题的企业提供清晰的思路和有效的解决方法，助力各行业保障纯化水系统的安全与稳定。

五、奥克泰士制药用水消毒专家：提供专项纯化水系统生物膜及不可接受微生物解决方案

（一）奥克泰士产品介绍

奥克泰士德国品质，供应杀孢子剂，专业除生物膜消毒剂，具有深度清理生物膜、杀灭霉菌、芽孢、革兰氏阴性菌等微生物的能力。

济南辰环保专业技术团队提供专项方案：

√微生物限度超标：制药用水系统需氧菌总数污染清除和控制策略

√生物药品（非无菌水基质，固体制剂）不可接受微生物污染：洋葱伯克霍尔德菌，皮氏罗尔斯通氏菌等。

√控制策略（预防）生物药品的纯化水系统预防不可接受微生物。

√水系统生物膜专项清除和控制方案。（所有制药用水系统，主要指纯化水和注射用水革兰氏阴性菌所导致的生物膜）

√受FDA效力范围内不可接受微生物管控，工厂化妆品、卫生用品、医疗器械等

（成功合作众多医药，实验室，科研，工厂等。）

（二）奥克泰士在纯化水系统中的应用优势

1. 深度清理生物膜：奥克泰士能够渗透生物膜内部，杀灭附着在生物膜上的微生物，并破坏生物膜的结构，从而有效去除生物膜。
2. 杀灭多种微生物：奥克泰士对霉菌，芽孢，铜绿假单胞菌、Bcc、罗尔斯通氏菌等不可接受微生物具有强大的杀灭能力，同时能够控制需氧菌总数。
3. 基本无腐蚀性：经过腐蚀性验证，奥克泰士对不锈钢等材料基本无腐蚀，保障设备和材料的使用寿命。
4. 无残留性：消毒完毕后，分解为水和氧气奥克泰士不会存在药剂存留，避免消毒剂对纯化水的二次污染。

（三）奥克泰士解决方案的核心优势

1. 丰富的微生物治理实践经验：奥克泰士拥有专业的工程师团队和丰富的处理经验，能够为药厂提供科学、有效的微生物控制方案。
2. 高品质的消毒剂产品：奥克泰士消毒剂采用德国品质原料生产，具有高效、广谱、安全等优点。
3. 全面的检测验证资料支持：奥克泰士提供完整的微生物的检测验证资料支持，以及验证报告，为制药企业提供全面的技术保障。