Amine PEG FITC，2411381-38-7的合成路径优化

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产品名称：Amine PEG FITC，2411381-38-7的合成路径优化
1. 结构基础与功能特性
分子组成：由氨基（-NH₂）、聚乙二醇（PEG）链（分子量可定制，如1k-20k Da）及荧光素异硫氰酸酯（FITC）通过硫脲键连接，分子式为(C₂H₄O)ₙC₂₅H₂₂N₂O₇。FITC提供强绿色荧光（Ex/Em≈494/521 nm），PEG链赋予水溶性与生物相容性，氨基用于进一步偶联生物分子（如抗体、肽）。
功能优势：兼具荧光标记、生物偶联及长循环特性，广泛应用于生物成像、药物递送及生物传感。
2. 合成路径优化策略
模块化设计：
步骤1：合成氨基-PEG中间体（如NH₂-PEG-COOH），通过EDC/NHS活化羧基，或采用点击化学引入DBCO/叠氮基团。
步骤2：FITC的异硫氰酸酯基团（-N=C=S）与氨基在弱碱性条件（pH 8.0-9.0）下发生亲核加成反应，生成稳定硫脲键。反应需避光、室温至37℃进行2-24小时，避免副反应。
步骤3：通过透析（截留分子量＞目标产物）、HPLC或GPC纯化，去除未反应单体及催化剂，冻干后获得固体粉末。
PEG链长度调控：
短链（＜2k Da）：反应速率快，适合需快速偶联的场景，但可能增加空间位阻。
长链（≥5k Da）：延长体内循环时间（通过EPR效应增强肿瘤富集），减少非特异性蛋白吸附，但需优化反应条件以平衡效率与产物稳定性。
点击化学集成：
在PEG链另一端引入DBCO或叠氮基团，通过无铜SPAAC反应与叠氮/炔基标记分子偶联，避免金属残留毒性，提升生物相容性。
3. 反应条件优化
溶剂与温度：采用DMF/DMSO/PBS混合溶剂，室温至37℃反应，pH 7.0-8.5，优化EDC/NHS用量（1:1-2:1比例），提升反应效率与产物纯度（≥95%）。
保护基策略：对氨基或FITC的活性基团进行Boc/Fmoc保护，避免副反应，确保区域选择性偶联。
4. 纯化与表征
纯化方法：透析、HPLC梯度洗脱（乙腈/水+0.1%TFA）或凝胶过滤色谱，结合冻干技术提高产物稳定性。
表征手段：
NMR/质谱：确认PEG链长、FITC及氨基特征峰，验证分子量及取代率。
FTIR：检测硫脲键（~1600-1700 cm⁻¹）、PEG链C-O-C伸缩（~1100 cm⁻¹）及FITC特征峰。
荧光光谱：验证激发/发射波长及荧光强度，确保标记效果。
5. 生物相容性与稳定性
生物相容性：通过MTT/CCK-8法验证细胞毒性（HEK293细胞存活率＞90%），溶血实验（溶血率＜5%）及炎症因子检测，确保符合生物医学应用标准。
稳定性：避光、干燥、-20℃保存，防止FITC荧光淬灭或PEG氧化；溶液需现配现用，避免反复冻融。

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