在氧化应激研究中,对超氧化物歧化酶(SOD)活性的准确定量是得出可靠结论的前提。目前,WST-1比色法是实验室中最常用且经典的SOD活性检测方法之一。
其原理巧妙而严谨:黄嘌呤氧化酶催化底物产生超氧阴离子(O₂⁻),O₂⁻可将一种水溶性四氮唑盐(如WST-1)还原生成水溶性的甲臜染料,该染料在450nm附近有最大吸收峰。当样本中含有SOD时,它会清除O₂⁻,从而抑制甲臜染料的生成。SOD活性越高,抑制率就越高。通过测定反应体系的吸光度变化,并与标准曲线或公式对比,即可计算出样本中的SOD活性单位。
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在实际实验中,为确保结果的准确性,需注意几个关键点:首先,样本的前处理至关重要。组织匀浆或细胞裂解液需充分离心取上清,避免细胞碎片干扰。其次,反应温度和时间需严格控制,因为酶促反应对条件敏感。最后,设置合理的对照(如不加样本的空白对照、不加酶的样本本底对照)是计算抑制率、排除干扰的基础。
为了帮助研究者规避常见实验陷阱,获得可重复的优质数据,亚科因生物(Abbkine)对其CheKine™ SOD活性检测试剂盒进行了全面优化。
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