IP实验的核心流程与关键试剂

一个标准的免疫沉淀（IP）实验，其成功依赖于对每个步骤的精准把控以及对关键试剂的正确选择。标准的流程通常包括以下核心步骤：

1. 样本制备：使用非变性裂解液裂解细胞或组织，以保持蛋白质的天然构象和相互作用。裂解液中需添加蛋白酶抑制剂混合物，防止目标蛋白在操作过程中被降解。
2. 预清除（可选但推荐）：为减少非特异性结合，可将裂解液与空白固相支持物（如未偶联抗体的磁珠）预孵育，吸附那些容易非特异性粘附的蛋白。
3. 抗体-抗原孵育：将裂解液与针对目标蛋白的特异性抗体（IP抗体） 在4°C下孵育，形成抗原-抗体复合物。
4. 复合物捕获：加入预先平衡好的Protein A/G磁珠或琼脂糖珠。Protein A/G能高亲和力地结合抗体的Fc段，从而将抗原-抗体复合物固定在固相支持物上。文档指出，与单独的Protein A或G相比，Protein A/G磁珠具有更广的抗体结合范围、更高的结合效率和更低的非特异性吸附。
5. 洗涤：使用温和的洗涤缓冲液多次洗涤磁珠，以去除非特异性结合的杂质。
6. 洗脱与检测：使用变性或非变性洗脱液将目标蛋白从磁珠上解离下来，然后通过Western Blot（WB） 进行检测和验证。

在整个流程中，对照的设置是结果判读的灵魂：

• Input（阳性对照）：直接取用部分细胞裂解液进行WB，用于验证样本中确实存在目标蛋白，是实验有效性的基础。
• IgG阴性对照：使用与IP抗体同种属来源的非特异性免疫球蛋白G（IgG） 代替特异性抗体进行全程IP操作。理论上，IgG不应结合任何目标蛋白。该对照用于排除由抗体、磁珠或样本本身引起的非特异性结合背景。

面对IP实验的复杂性，选择一套设计周全、组分齐全的工具可以事半功倍。亚科因生物（ABBKINE） 提供的通用型免疫（共）沉淀（IP/Co-IP）工具箱，正是为此而生。

该工具箱不仅包含了高质量的非变性裂解液、蛋白酶抑制剂、Protein A/G磁珠和洗脱缓冲液，还贴心地提供了即用型IgG阴性对照，帮助研究者一站式完成从样本处理到对照设置的所有关键步骤，极大地提升了实验的标准化程度和结果的可信度。