Streptavidin-Cy3/Cy5 Conjugate：Streptavidin结合物的对比分析

一、Streptavidin–Cyanine3 Conjugate（Cy3-Streptavidin）
1. 组成与化学特征
蛋白主体：Streptavidin
来源于 Streptomyces avidinii，为四聚体蛋白，每个四聚体可结合 4 个生物素（Kd ≈ 10⁻¹⁵ M）。
荧光染料：Cyanine3（Cy3）
属于橙红色光谱的花青染料，激发峰约 548–555 nm，发射峰约 565–570 nm。
标记方式：常通过 NHS 酯或 Maleimide 化学，与蛋白赖氨酸氨基等位点形成稳定的共价键。
标记密度：一般 2–7 dye/protein，可调节以控制荧光亮度与生物活性平衡。
光稳定性：中等，亮度高，但抗漂白性不如 Cy5。
二、Streptavidin–Cyanine5 Conjugate（Cy5-Streptavidin）
1. 组成与化学特征
蛋白主体：Streptavidin
同样为四聚体生物素结合蛋白，维持高亲和力与较低非特异性结合。
荧光染料：Cyanine5（Cy5）
深红/远红色花青染料，激发峰约 640–650 nm，发射峰约 665–670 nm。
标记方式：NHS 酰胺键或 Maleimide-硫醇键连接，保证蛋白功能保留。
标记密度：通常 2–6 dye/protein，避免高密度导致自淬灭。
光稳定性与穿透深度：Cy5 光稳定性强，生物样品自发荧光低，适合深层成像。

三、Cy3-Streptavidin 与 Cy5-Streptavidin 的比较
1. 光谱差异（核心区别）
Cy3-Streptavidin：橙红波段（~550/570 nm），适合作为中波段荧光探针。
Cy5-Streptavidin：远红波段（~650/670 nm），背景*低，穿透*强，信噪比更高。
2. 应用场景偏好
Cy3 适用于：
普通免疫荧光成像
细胞流式检测（PE/Cy3 区域）
中等灵敏度检测
与绿色染料配对的双标实验
Cy5 适用于：
深部组织成像
高背景样品、含自动荧光样本
高灵敏或高动态范围测定
多重成像（与 FITC/Cy3/Alexa dyes 完全区分）
体内成像或长时间曝光实验
3. 信噪比与背景干扰
Cy3：容易受到生物材料自身橙绿区域自发荧光的影响。
Cy5：位于近红光区，生物体自发荧光*低，信噪比远高于 Cy3。
4. 光稳定性与实验耐受性
Cy3：中等，易受长时间激发影响。
Cy5：更高光稳定性，适合定量与超分辨成像。
5. 多色实验兼容性
Cy3：适合作为第二色，搭配 FITC/Alexa488 等。
Cy5：常作为第三或第四色，与 FITC/Cy3/Alexa568 同时使用不串色。
6. 荧光亮度与动态范围
Cy3：亮度高但动态范围中等。
Cy5：亮度强、动态范围大，适合低浓度目标的检测。
四、总结重点
Cy3-Streptavidin = 中波段、亮、适用常规 IF/Flow/FISH。
Cy5-Streptavidin = 远红、信噪比高、适合深度成像、多重染色和高灵敏实验。
用途：科研
状态：固体/粉末/溶液
保存：冷藏
供应：西安齐岳生物科技有限公司
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