Cancer Commun | 詹成蒋伟团队揭示抗CD24对EGFR靶向治疗的联合增敏作用

肺癌是目前最常见的肿瘤类型，其中EGFR突变是引发肺癌最重要的驱动因素。针对这一情况，EGFR-酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）应运而生，特别是第三代EGFR-TKIs，已成为全球EGFR突变肺癌患者的一线治疗方案。然而，尽管第三代EGFR-TKIs在初治时效果显著，但往往无法实现完全缓解，常会残留肿瘤组织，导致患者在10-20个月内出现病情进展。因此，探索新的治疗策略以增强第三代EGFR-TKIs疗效显得尤为迫切。

免疫治疗与EGFR-TKIs联合使用在治疗肺癌方面具有巨大潜力。然而，目前采用的免疫治疗策略，如针对程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）或程序性死亡配体1（PD-L1）的免疫检查点抑制剂（ICIs），与EGFR-TKIs联用时效果并不理想。多项研究表明，EGFR-TKI治疗会显著下调肿瘤细胞中的PD-L1表达，这可能是ICIs与EGFR-TKIs联合疗效不佳的原因之一。因此，寻找PD-1/PD-L1之外的新免疫治疗靶点，对于提高第三代EGFR-TKIs在EGFR突变肺癌患者中的疗效至关重要。

近日，复旦大学附属中山医院胸外科的詹成、蒋伟团队在这一领域取得了重要研究成果，相关论文以

CD24 is a promising immunotherapeutic target for enhancing efficacy of third-generation EGFR-TKIs on EGFR-mutated lung cancer

为了寻找能够增强EGFR-TKIs疗效的潜在靶点，研究团队对药物敏感细胞、耐受持久细胞（DTPC）、耐药细胞以及小鼠、患者肺癌标本进行了转录组测序、单细胞测序等检测。结果显示，在药物敏感细胞、DTPC、耐药细胞，以及EGFR-TKI治疗后的小鼠与患者临床标本中，CD24的表达均显著上升，且其表达水平与患者预后密切相关。其中CD24作为关键的“别吃我”信号分子，介导肿瘤细胞抗巨噬细胞吞噬，在肿瘤免疫中发挥着重要作用。

研究团队进一步采用CRISPR/Cas9技术在多个EGFR突变细胞系中敲除、以及敲除后重新过表达CD24，发现CD24显著提升了细胞对第三代EGFR-TKIs的耐药性。同时，通过与巨噬细胞的共培养实验，研究团队发现CD24能够显著抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。此外，研究团队在体外实验中采用I类创新药物CD24单抗ATG-031来阻断CD24，发现这可以显著提升第三代EGFR-TKI处理下的巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。

在裸鼠CDX模型中，研究团队发现CD24敲除的PC-9细胞移植瘤对第三代EGFR-TKI奥希替尼治疗的响应程度显著高于野生型组。同时，研究团队在CDX模型、肺原发成瘤小鼠和PDX模型中，均发现联合使用ATG-031和奥希替尼具有协同增敏作用。而清除小鼠的巨噬细胞后，这一协同增敏作用则大幅削弱，这充分表明ATG-031通过阻断CD24介导的抗巨噬细胞吞噬作用，从而与第三代EGFR-TKI产生协同增敏效果。

研究团队深入探索了第三代EGFR-TKI处理下CD24表达增高的机制。鉴于CD24在mRNA和蛋白水平均显著增高，因此，研究团队假设转录因子可能是导致CD24表达上升的原因。通过DNA亲和沉淀结合质谱分析，研究团队鉴定出多个与CD24基因启动子序列显著结合的候选转录因子。进一步结合ChIP-Seq、siRNA敲减、ChIP-qPCR和双荧光素酶报告实验等，研究团队证实转录因子YY1能够特异性结合并激活CD24基因启动子。

但是，研究团队发现，YY1的表达在第三代EGFR-TKI处理下并无显著改变。因此，研究团队深入研究了DNA亲和沉淀结合质谱分析结果以及耐药细胞的磷酸化组学等，发现第三代EGFR-TKIs处理诱导了YY1在S247位点的磷酸化。通过引入YY1 S247A突变等实验，研究团队明确了YY1 S247磷酸化是CD24表达上升的关键。进一步的EMSA、免疫荧光实验、CoIP和3C实验等结果表明，YY1 S247磷酸化通过CD24基因的增强子-启动子环促进CD24表达。结合磷酸化组学和抑制剂等研究，研究团队进一步发现JNK是YY1 S247的关键上游激酶。

综合上述结果，研究团队提出了以下机制：“第三代EGFR-TKI通过JNK激酶诱导YY1 S247磷酸化，增强YY1介导的增强子—启动子环，从而促进CD24表达并抑制巨噬细胞吞噬；而ATG-031等CD24免疫治疗则能够显著增强第三代EGFR-TKI的疗效”（下图）。

最后，研究团队还揭示，第一代和第二代EGFR-TKIs、ALK和KRAS靶向治疗等同样会导致CD24表达显著增加。这表明ATG-031等CD24免疫治疗同样可能对上述治疗方案具有协同增敏作用，值得进一步深入研究。

复旦大学附属中山医院胸外科詹成副研究员、蒋伟副主任医师为本文共同通讯作者。复旦大学附属中山医院胸外科梁嘉琪博士、毕国澍博士、黄小龙博士为论文共同第一作者。

原文链接：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/cac2.70068

制版人：十一

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