血浆miRNA提取注意事项

microRNA（miRNA）是一类长度约为 19-25 个核苷酸的内源性非编码单链 RNA 分子，在进化过程中呈现高度保守性。其核心生物学功能在于通过转录后调控机制（如靶向 mRNA 降解、抑制翻译过程等）精准调控基因表达，进而深度参与细胞增殖、分化、凋亡及新陈代谢等关键生命活动，已成为当前生命科学领域基因调控机制研究的核心方向之一。

在血浆 miRNA 相关研究中，实现对目标 miRNA 的精准检测与准确定量是揭示其生物学功能及临床应用价值的前提，而高效、高纯度的血浆 miRNA 提取则是整个实验流程的首要技术环节，直接决定后续检测结果的可靠性与重复性。

当前血浆 miRNA 提取过程中面临两大难点，具体如下：

1.试剂盒适配性不足：市面上多数商业化核酸提取试剂盒的设计初衷为富集大分子核酸（包括核糖体 RNA、信使 RNA及基因组 DNA），针对 19-25 个核苷酸的小分子 miRNA 提取效率普遍偏低。其关键限制因素在于，小分子核酸难以通过传统醇类沉淀法实现有效富集，同时也无法与核酸纯化膜或磁珠表面形成稳定吸附作用，导致目标 miRNA 大量流失。

2.样本中 miRNA 丰度极低：miRNA 在各类生物样本中的天然含量本就处于较低水平，以快速增殖的哺乳动物单细胞为例，其总 RNA 含量约为 10-30pg，而 miRNA 在总 RNA 中的占比仅为 0.003%-0.02%；而血浆作为无细胞生物流体样本，其 miRNA 主要来源于细胞分泌的外泌体、微囊泡或细胞裂解释放的少量游离分子，进一步导致其含量远低于细胞样本，极大增加了提取过程中的目标分子捕获难度。

针对上述技术难点，需采用创新性技术策略以提升血浆 miRNA 提取效率。目前研究证实，miRNA 富集法是解决该问题的有效方案，其技术原理如下：首先通过特异性富集试剂与血浆中的小分子 miRNA 发生相互作用，形成 miRNA - 试剂复合物，实现目标分子的选择性聚集；随后利用核酸纯化柱对聚集后的 miRNA 复合物进行吸附、洗涤与洗脱，完成纯化过程。该策略的核心优势体现在两方面：一方面，miRNA 聚集后其分子粒径与浓度显著提升，可与纯化膜形成高效吸附，大幅提高目标分子的提取得率；另一方面，在富集过程中可实现大分子 DNA、rRNA、mRNA的同步去除，有效避免了传统提取方法中miRNA发生选择性丢失情况，显著提升了提取过程的特异性与效率。

在商业化产品应用层面，目前国内掌握该类富集技术的企业较少，其中 Qiagen、BIOG 等品牌推出的 miRNA富集提取试剂经实验验证，在血浆样本的miRNA 提取效率、纯度及重复性方面表现突出，可作为血浆miRNA相关研究中的优先选择。