动物行为实验指南丨啮齿动物自发痛（spontaneous pain）实验总结

很多动物行为学实验测试中，需要使用食物奖励，相信大家一定遇见过动物不爱吃饵料，导致实验不能顺利开展的情况。今天，我们给大家推荐的饵料品质类比进口的颗粒饵料，欢迎有需要的老师联系下单！可应用于MED、上海欣软等厂商提供的标准斯金纳箱，自给药箱，触屏实验箱，五孔触鼻实验箱，迷宫实验等。

自发痛（spontaneous pain）：是指炎症或损伤后，在无刺激的情况下，机体自发产生的持续性疼痛，比如腰背痛，是一种“无中生有”的疼痛。比如有研究报道，大鼠的后肢神经被切断后几周，大鼠会自发的咬掉已经失去知觉的足趾。这种自残行为是自发痛导致的一种反应。

自发痛行为检测测量前，各组小鼠适应测量环境3d。测量时，在一个安静、温度维持在（20-25）℃的房间进行。正式测定前，将小鼠放置在独立有机玻璃容器内适应20min，然后连续观察并记录其行为5min。研究使用的量表为：0＝手术侧爪正常按压在地板上；1＝爪子轻轻地放在地板上；2＝只有爪子的内侧被压在地板上；3＝只有脚后跟压在地板上，后爪倒置；4＝整个爪子抬起；5＝动物舔了舔受伤的爪子。采用最大尺度数估计实验小鼠自发疼痛相关行为。

capsaicin和formalin自发痛模型：

小鼠用乙醚麻醉后，小鼠左后足底皮下注入20µl capsaicin（0.06%）或formalin（1%），将动物放置于在实验台上方30cm高的支撑架上放置的透明有机玻璃测试箱中。对注射capsaicin的动物分别观察1min内小鼠的自发痛行为（咬足、舔足、抬足以及甩足）反应的时间，连续记录10min。对注射formalin的动物分别观察60min内小鼠的自发痛行为反应，记录每5min内的咬足、舔足、抬足以及甩足的总时间。

小鼠自发痛行为检测

小鼠左足底注射capsaicin或formalin后，立即放入棕色有机玻璃箱内（20×20×20cm），观察其跛足、舔足、咬足和缩足等痛行为表现。通过测量小鼠在formalin注射后每5min和capsaicin注射后每1min的时间间隔内，在抬起和舔被注射的后爪上所花费的时间来确定自发痛行为，分别观察60min和10min。足底注射formalin后，动物的自发痛反应包括一个早期的第一相反应和一个较晚的第二相反应。第一相反应（phaseI，0-5min）主要是由外周刺激引起的C纤维激活引起，而第二相反应（phaseII，15-50min）依赖于外周组织的炎症反应以及脊髓背角的功能变化。formalin的足底皮下注射诱导了一种双相自发痛反应，记录动物的抬足、舔足、缩足甚至是咬足行为。该反应包括在最初的5min内phaseI剧烈的自发痛反应，随后这些行为出现短暂下降，之后会出现phaseII的行为，大约持续30-60min。对小鼠缩足、抬足和舔足行为持续时间的分析。

大鼠：

实验对象是51只雄性的健康成年Sprague-Dawley大鼠，体重为250±30g，饲养环境温度波动于20℃～25℃，相对湿度波动于50%～70%，光照12小时：无光照12小时，笼子垫软木屑，每天更换垫料，每天换食水，保证食物和水充足。试验开始前正常饲养1周。

大鼠自发痛及激惹痛的测试

激惹疼痛行为评分方法如下（0-4分）：用长棉签头擦刷大鼠背部，四肢，及足爪处的被毛，刷擦时避免触碰患侧足，根据大鼠的反应给出相应的分值：4分为有≥1种以下表现：攻击棉签，频繁或者持续发出痛苦嘶叫声，转圈，舔咬患肢；3分为有≥2种以下表现：被毛竖立，撤缩足爪，偶而发出痛苦嘶叫声；2分为有≥1种以下表现：被毛竖立，缩回患足，偶发出痛苦的声音；1分为大鼠躲避刺激或保护患肢；0分为大鼠行为正常，灵活警惕，有好奇性；。在测验观察中，还出现大鼠朝向检测者发怒、跳跃、嘶叫者。

实验中观察到，大鼠造模后由于疼痛，导致大鼠频繁自发抬足，甚至不敢足部着地。按照前述的自发痛评级，记录并统计其分级。自发疼痛行为评分方法如下（0-4分）：4分为有≥1种以下表现：转圈，舔咬患肢，频繁或持续发出痛苦嘶叫声；3分为有≥2种以下表现：被毛竖立，偶发出痛苦嘶叫声，向患侧关注增加；2分为有≥1种以下表现：毛竖立，偶发出痛苦嘶叫声，向患侧关注增加；1分为大鼠出现蜷缩，挖洞，躲藏行为；0分为大鼠行为正常，灵活警惕，有好奇性。

造模后的大鼠均出现自发痛，大多数表现为1级的表现，包括出现蜷缩、挖洞或躲藏行为，少量大鼠表现出2～4级的自发痛表现，包括发出痛苦的声音、偏向关注患侧等。治疗后大鼠的自发痛略有缓解，症状表现上有所改善，如抬足次数减少，日常活动较前改善，但治疗2周时评级上变化并不明显，大部分大鼠仍为1级的表现，治疗前评价在2～4分的大鼠，评级均表现出下降趋势。

文献引用：

1、Complex Regional Pain Syndrome: Practical Diagnostic and Treatment Guidelines, 5th Edition.[J]. Harden R Norman;McCabe Candida S;Goebel Andreas;Massey Michael;Suvar Tolga;Grieve Sharon;Bruehl Stephen.Pain medicine (Malden, Mass.),2022

2、Checklist on the Quality of the Repetitive Peripheral Magnetic Stimulation (rPMS) Methods in Research: An International Delphi Study [J]. Schneider Cyril;Zangrandi Andrea;Sollmann Nico;Bonfert Michaela Veronika;Beaulieu Louis David.Frontiers in Neurology,2022

3、Analgesic effects of a 5-HT3 receptor antagonist in an animal model of complex regional pain syndrome.[J]. Park J H;Lee CH;Ham H D;Choi ES;Lee C;Lee S.European review for medical and pharmacological sciences,2021

4、Substance P serum degradation in Complex Regional Pain Syndrome - another piece of the puzzle?[J]. König Simone;Engl Christian;Bayer Malte;EscolanoLozano Fabiola;Rittner Heike;Rebhorn Cora;Birklein Frank.The journal of pain,2021

5、G蛋白耦联型雌激素受体介导的神经细胞钙信号和对吗啡镇痛及耐受的影响[D]. 丁晓维.上海交通大学,2017

6、背根神经节K_(2p)1.1基因甲基化参与神经病理性疼痛的机制研究[D]. 毛庆祥.第三军医大学,2017

7、NALP1炎症小体在大鼠神经痛及痛情绪中的作用及电针缓解痛情绪作用观察[D]. 李倩.复旦大学,2014

8、曲福玲. 不同频率的rPMS对复杂性区域疼痛综合征Ⅰ的治疗作用及机制研究[D].中国医科大学,2023.