卡尔文智能热板仪在测试小鼠后肢疼痛实验中的应用 

一、概述热板法是镇痛药物筛选、检测中常用的一种方法，也是一种能确定区分中枢神经和末梢神经镇痛机理的方法，有较宽的使用范围，过去由于在使用中温度控制不严格， 计时不准确和人员操作上的误差， 往往使实验做出的结果特异性不高，根据以上问题，智能热板仪进行了全新的设计，拥有更精准的温度控制。热板法实验中有三个关键地方：一是热板的表面，表面应当有良好的热传导性和一定的光洁度，使动物的足底与热板有充分的接触面积便于热量的传导，达到致痛的目的，同时又要有耐酸碱、抗腐蚀和较强硬度的物理要求，为此，我们对热板表面进行了处理，抗腐蚀性超过不锈钢，表面光洁度完全符合热板法实验的要求。二是温度控制，温度控制是热板仪的核心问题，温度控制不准，波动过大，必然造成动物痛反应潜伏时间的巨大误差，如控制温度波动2℃时动物的痛反映潜伏时间能差5-6秒有时直接使实验结果失去意义，为此我们在温控方面使用了微电脑点阵采样技术0．25秒的采样间隔，自控调整幅度精确，使热板表面温度控制在±0．2℃之内，完全符合药理实验要求。三是计时，计时的准确程度足热板仪能否更确切的描述出药物影响动物痛阈的关键，如果以秒计时，往往使药物作用的微小差异被掩盖，如，5．01秒和5．91秒相差近1秒，当用秒显示时显示的都足5秒，这个差在药理学实验方面就显得很有意义了。新的智能热板仪还增加了打印功能和脚踏、手揿有线控制功能，能方便的完成对小鼠、大鼠、豚鼠的检测实验，是教学和科研理想的仪器。本仪器使用简便，指标明确，对组织损伤最小，动物可反复使用，痛反应潜伏期较长，便于观察及测出药物之间的较小差异，比较出药物镇痛作用的强弱、快慢及持续时间。点击输入图片描述（最多30字）二、实验动物的选择疼痛的动物模型受到多种调节因素的重要影响，包括性别、基因型和社会交流，在使用动物模型时必须考虑所有这些因素。在实验动物的性别上，热板测试一定要选择雌鼠，因为雄鼠是有睾丸的，实验时阴囊的皮肤会不可避免地紧贴于金属热板，睾丸对热的感受比爪子更敏感，因此产生了混淆效应，而且动物会异常暴躁，影响实验。疼痛研究中最常用的动物是实验室大鼠，基本的热板实验可以选择年轻的成年雌性Sprague Dawley大鼠。但是最近将这些疼痛模型应用于具有靶向基因突变的小鼠已被证明是一种强大的工具，然而，大鼠和小鼠的行为反应可能不同。如果首次将已建立的大鼠模型应用于小鼠，请务必牢记这一点。对于转基因小鼠是否可以作为疼痛模型，虽然充满了解释的复杂性，但是转基因技术改变了基本的疼痛研究，即使在没有选择性配体或抗体的情况下，也可以研究单个蛋白质在疼痛中的作用。这项技术也意味着许多实验室已经从使用大鼠转向使用小鼠了。这种转变并非没有代价：在许多实际方面，小鼠作为疼痛实验对象不如大鼠。但广泛使用转基因小鼠的一个幸运结果是越来越关注遗传背景对疼痛敏感性的影响。三、测试流程1、实验材料1)最佳年龄的小鼠或大鼠（一般是6至8周）。2)测试药物和溶剂对照。3)热板装置（可配备表面温度计，用于校准和维护设备）。2、适应1)将动物从饲养室转移到实验室，称重并记录，让动物适应实验室环境至少半小时。2)设置金属板温度与测试室的温度匹配并清洁测试板表面。3)将单个受试者动物放入测试小室中，不受干扰地探索15分钟。4)取出动物并清洁板表面的任何尿液或粪便。3、测试1)将热板温度设置为测试温度，范围通常在55 °C。2)一旦达到预设温度，将适应好的实验动物放在热板上。3)测量第一次出现伤害反应（例如，舔足，后爪抬起或跳跃）的潜伏期。设置终止时间，例如给药后，动物没有明显的伤害感受反应，则必须在提前规定的终止时间后将动物从热板上移开，以免对动物造成组织损伤。4)出于伦理原因，出现伤害反应后应快速将动物从测试表面上移开，以避免不必要的痛苦或组织损伤。5)将测试过的动物放入与未测试的动物分开的笼子中。大/小鼠可以通过各种嗅觉和超声波系统进行交流，这可能是焦虑和恐惧的来源。6)将测试板温度恢复到室温，并清洁金属板的表面。4、测试多种温度如果在多个温度下测试相同的小鼠，则应将测试分开至少24小时，以避免动物心理压力和重复测试对潜伏期时间的影响。五、注意事项温度控制：- 环境温度宜控制在18~20℃，热板温度过高可能导致组织损伤，过低则无法有效激发疼痛反应。通常选择55°C作为标准温度。2. 实验时间：- 实验开始前应对动物进行环境适应训练;应设立截止时间，以避免组织烫伤。3.动物福利：- 遵循动物实验伦理规范，尽量减少动物的痛苦。由于雄性小鼠受热后阴囊下垂，阴囊皮肤对热敏感，易致动物跳跃，无法观察到舔足反应，故实验多选用雌性小鼠。4. 设备校准：- 定期用温度传感器验证温度，确保实验结果的准确性以及一致性。5. 环境控制：- 实验环境应保持安静，避免外界干扰影响动物行为。6. 记录数据：记录时间点通常包括给药前基础值、给药后30min、60min、90min和120min;测量基础值时应对动物进行初筛，以剃除反应不敏感或极敏感的动物。具有镇静、肌松等作用的药物常出现假阳性，不宜应用本法进行药效筛选与评价。六、讨论热板法疼痛行为实验(HPPT)通过测量动物对热刺激的反应时间，以间接评估其疼痛感受阈值。该方法简单易行，可以快速地评估疼痛感受阈值，并且可以对不同类型的疼痛进行评估。热板法作为常用的作用于中枢系统的镇痛药筛选方法，已得到广泛而有效的应用，其与醋酸扭体实验相结合，能初步区分镇痛药是作用于中枢还是外周;而与福尔马林诱导的痛反应检测相结合，则可进一步明确镇痛药的中枢或外周作用位点。然而，该实验方法也存在一些缺点。在实验过程中会不可避免地对动物造成一定的压力和痛苦，而且结果可能会受到许多外来因素的影响，如环境温度、动物情绪等。总的来说，热板法疼痛行为学实验是一种重要的动物行为学实验，可以用于评估疼痛感受阈值。在使用该方法时，需要注意动物福利和伦理规定，结合其他方法进行综合评估，以获得更加准确和全面的结果。智能热板仪在测试小鼠后肢疼痛实验中的应用

一、概述

热板法是镇痛药物筛选、检测中常用的一种方法，也是一种能确定区分中枢神经和末梢神经镇痛机理的方法，有较宽的使用范围，过去由于在使用中温度控制不严格， 计时不准确和人员操作上的误差， 往往使实验做出的结果特异性不高，根据以上问题，智能热板仪进行了全新的设计，拥有更精准的温度控制。

热板法实验中有三个关键地方：

一是热板的表面，表面应当有良好的热传导性和一定的光洁度，使动物的足底与热板有充分的接触面积便于热量的传导，达到致痛的目的，同时又要有耐酸碱、抗腐蚀和较强硬度的物理要求，为此，我们对热板表面进行了处理，抗腐蚀性超过不锈钢，表面光洁度完全符合热板法实验的要求。

二是温度控制，温度控制是热板仪的核心问题，温度控制不准，波动过大，必然造成动物痛反应潜伏时间的巨大误差，如控制温度波动2℃时动物的痛反映潜伏时间能差5-6秒有时直接使实验结果失去意义，为此我们在温控方面使用了微电脑点阵采样技术0．25秒的采样间隔，自控调整幅度精确，使热板表面温度控制在±0．2℃之内，完全符合药理实验要求。

三是计时，计时的准确程度足热板仪能否更确切的描述出药物影响动物痛阈的关键，如果以秒计时，往往使药物作用的微小差异被掩盖，如，5．01秒和5．91秒相差近1秒，当用秒显示时显示的都足5秒，这个差在药理学实验方面就显得很有意义了。新的智能热板仪还增加了打印功能和脚踏、手揿有线控制功能，能方便的完成对小鼠、大鼠、豚鼠的检测实验，是教学和科研理想的仪器。本仪器使用简便，指标明确，对组织损伤最小，动物可反复使用，痛反应潜伏期较长，便于观察及测出药物之间的较小差异，比较出药物镇痛作用的强弱、快慢及持续时间。

二、实验动物的选择

疼痛的动物模型受到多种调节因素的重要影响，包括性别、基因型和社会交流，在使用动物模型时必须考虑所有这些因素。

在实验动物的性别上，热板测试一定要选择雌鼠，因为雄鼠是有睾丸的，实验时阴囊的皮肤会不可避免地紧贴于金属热板，睾丸对热的感受比爪子更敏感，因此产生了混淆效应，而且动物会异常暴躁，影响实验。疼痛研究中最常用的动物是实验室大鼠，基本的热板实验可以选择年轻的成年雌性Sprague Dawley大鼠。但是最近将这些疼痛模型应用于具有靶向基因突变的小鼠已被证明是一种强大的工具，然而，大鼠和小鼠的行为反应可能不同。如果首次将已建立的大鼠模型应用于小鼠，请务必牢记这一点。

对于转基因小鼠是否可以作为疼痛模型，虽然充满了解释的复杂性，但是转基因技术改变了基本的疼痛研究，即使在没有选择性配体或抗体的情况下，也可以研究单个蛋白质在疼痛中的作用。这项技术也意味着许多实验室已经从使用大鼠转向使用小鼠了。这种转变并非没有代价：在许多实际方面，小鼠作为疼痛实验对象不如大鼠。但广泛使用转基因小鼠的一个幸运结果是越来越关注遗传背景对疼痛敏感性的影响。

三、测试流程

1、实验材料

1)最佳年龄的小鼠或大鼠（一般是6至8周）。

2)测试药物和溶剂对照。

3)热板装置（可配备表面温度计，用于校准和维护设备）。

2、适应

1)将动物从饲养室转移到实验室，称重并记录，让动物适应实验室环境至少半小时。

2)设置金属板温度与测试室的温度匹配并清洁测试板表面。

3)将单个受试者动物放入测试小室中，不受干扰地探索15分钟。

4)取出动物并清洁板表面的任何尿液或粪便。

3、测试

1)将热板温度设置为测试温度，范围通常在55 °C。

2)一旦达到预设温度，将适应好的实验动物放在热板上。

3)测量第一次出现伤害反应（例如，舔足，后爪抬起或跳跃）的潜伏期。设置终止时间，例如给药后，动物没有明显的伤害感受反应，则必须在提前规定的终止时间后将动物从热板上移开，以免对动物造成组织损伤。

4)出于伦理原因，出现伤害反应后应快速将动物从测试表面上移开，以避免不必要的痛苦或组织损伤。

5)将测试过的动物放入与未测试的动物分开的笼子中。大/小鼠可以通过各种嗅觉和超声波系统进行交流，这可能是焦虑和恐惧的来源。

6)将测试板温度恢复到室温，并清洁金属板的表面。

4、测试多种温度

如果在多个温度下测试相同的小鼠，则应将测试分开至少24小时，以避免动物心理压力和重复测试对潜伏期时间的影响。

五、注意事项

1. 温度控制：

- 环境温度宜控制在18~20℃，热板温度过高可能导致组织损伤，过低则无法有效激发疼痛反应。通常选择55°C作为标准温度。

2. 实验时间：

- 实验开始前应对动物进行环境适应训练;应设立截止时间，以避免组织烫伤。

3.动物福利：

- 遵循动物实验伦理规范，尽量减少动物的痛苦。由于雄性小鼠受热后阴囊下垂，阴囊皮肤对热敏感，易致动物跳跃，无法观察到舔足反应，故实验多选用雌性小鼠。

4. 设备校准：

- 定期用温度传感器验证温度，确保实验结果的准确性以及一致性。

5. 环境控制：

- 实验环境应保持安静，避免外界干扰影响动物行为。

6. 记录数据：

记录时间点通常包括给药前基础值、给药后30min、60min、90min和120min;测量基础值时应对动物进行初筛，以剃除反应不敏感或极敏感的动物。具有镇静、肌松等作用的药物常出现假阳性，不宜应用本法进行药效筛选与评价。

六、讨论

热板法疼痛行为实验(HPPT)通过测量动物对热刺激的反应时间，以间接评估其疼痛感受阈值。该方法简单易行，可以快速地评估疼痛感受阈值，并且可以对不同类型的疼痛进行评估。热板法作为常用的作用于中枢系统的镇痛药筛选方法，已得到广泛而有效的应用，其与醋酸扭体实验相结合，能初步区分镇痛药是作用于中枢还是外周;而与福尔马林诱导的痛反应检测相结合，则可进一步明确镇痛药的中枢或外周作用位点。

然而，该实验方法也存在一些缺点。在实验过程中会不可避免地对动物造成一定的压力和痛苦，而且结果可能会受到许多外来因素的影响，如环境温度、动物情绪等。

总的来说，热板法疼痛行为学实验是一种重要的动物行为学实验，可以用于评估疼痛感受阈值。在使用该方法时，需要注意动物福利和伦理规定，结合其他方法进行综合评估，以获得更加准确和全面的结果。