动物模型与评估丨鼻炎嗅觉障碍大鼠模型

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大鼠变应性鼻炎嗅觉障碍模型的建立

将40只健康成年雄性的SD大鼠随机分为正常对照组（N组）10只、实验组（AR组）30只。采用鼠笼编号和黑色、红色颜料作标记，黑色代表个位数，红色代表十位数，把涂在左前腿上的计为１，左侧腹部计为2，左后腿为3，头顶部计为4，腰背部为5，尾基部为6，右前腿为7，右侧腰部为8，右后腿计为9，由此分为正常对照组（N组）１~１0，过敏性鼻炎组（AR组）1~30。

AR组：将0.30mg卵清蛋白和30mg氢氧化铝加入1ml生理盐水混匀成混悬液，注入大鼠腹腔，隔日一次，共7次；然后用微量移液器将2％的卵清蛋白滴入大鼠双侧鼻腔，每侧50ul，每天一次，共7天；建立AR动物模型。N组动物以0.9％NaC1溶液代替卵清蛋白，其余方法和步骤不变。

随机选取N组大鼠5只，Ａ组大鼠6只，O组大鼠6只，用4％的异氟烷麻醉大鼠，将麻醉好的大鼠仰卧位固定于专用动物检查床上，用橡皮筋将大鼠的上切牙固定，使双侧的鼻孔充分暴露，然后将微量移液器的头缓慢放入鼻孔，但不要接触鼻黏膜，各取3ul的0．1mol／1MnC12溶液分别滴入左（或右）侧鼻腔，在滴入过程中速度要均匀、缓慢以确保1MnC12溶液不被呛出，滴完后将大鼠保持仰卧位约5分钟。等大鼠麻醉清醒后，再将其放入干净、封闭的鼠盒中。取清凉油0．3ｇ均匀涂在盒子的各个角处，让大鼠充分暴露在气味下，间断性暴露30分钟（暴露5分钟后取出大鼠，间隔5分钟再次放入盒中）。

行为学观察

每次2％的卵清蛋白滴鼻后，观察大鼠抓鼻、喷嚏及鼻溢的情况30分钟，并进行叠加积分评价物模型积分大于5分表示造模成功。对造模成功的AR组大鼠在激发后9小时另加观察其行为学情况，观察时间亦为30分钟，用以评价其是否有慢性病程。分别对抓鼻和喷嚏进行计数资料统计，流涕分等级为：正常，流至鼻前孔（＋），流出鼻前孔（＋＋），涕流满面（＋＋＋），行等级资料统计（Graphpad Prism5统计分析软件进行方差分析）。

Table１症状积分评价

正常对照组偶见喷嚏，抓鼻次数较少，无流涕。叠加积分均小于5分。AR组大鼠全部都有打喷嚏，不停用双前爪抓鼻，大鼠前鼻孔可见抓痕及血丝，鼻腔分泌物增加，常常流至前鼻孔，30只大鼠叠加积分都大于5分。并于激发后9小时观察大鼠喷嚏次数较正常对照组多，抓鼻也多于正常，但鼻腔分泌物和正常对照组无差异，有一只大鼠出现明显喘鸣音，呼吸音重，胸腹反式呼吸，考虑为过敏性鼻炎并发支气管哮喘。

Table2 各组大鼠流涕程度（表中数值为相应的大鼠只数）

埋藏食物小球实验:

经训练及造模后的30只AR组大鼠在造模结束后第二天进行实验，同时对１0只正常对照组进行实验，为了避免昼夜节律变化的影响，所有实验大鼠的检查均在下午4点至7点之间进行（实验前大鼠禁食8小时左右）。埋藏食物小球实验（Buried food pellet test，BFT）训练在实验用的盒子（大小约40cmＸ26cmＸ20cm）中铺上厚约3cm的大鼠垫料，垫料密度尽量均匀，然后将1g重的食物小球随机埋藏在大约0．5cm深处的垫料中。放入限食后的大鼠，使其寻找到该食物小球，并允许其吃掉找到的食物小球，然后根据其寻找所需时间逐渐把食物小球埋藏深度加大，使其寻找时间在１分钟至3分钟之间，经过反复的预实验，发现在本实验室条件下食物小球埋藏距离在0．8cm左右较为合适。逐个训练大鼠，直至所有大鼠均能在3分钟之内寻找出埋藏于0．8cm深垫料下的食物小球。记录大鼠找到食物小球（双前肢抱住或牙齿咬住食物小球）所用的时间，食物小球位置随机变化，每天每只大鼠测试１次，连续5天，结果取平均值。平均值超过300s的即认为存在嗅觉障碍，记为嗅觉障碍组（O组），平均值低于300s的即认为无嗅觉障碍的过敏性鼻炎组（A组）。

嗅觉功能评估结果:

应用埋藏食物小球试验，分别对变应性鼻炎模型组大鼠及对照组大鼠进行嗅觉功能评估。其中对照组１0只大鼠均可于300秒内找到埋藏的食物小球，平均时间为92±5秒。而变应性鼻炎模型组大鼠中，有１8只大鼠于300秒内可找到食物小球，平均时间为１63±6秒，将其归为变应性鼻炎不伴嗅觉障碍组。其佘１2只均无法在300秒内寻找到埋藏的食物小球，归为变应性鼻炎伴嗅觉障碍组。

文献引用：

1.Mapping of the mouse olfactory system with manganese-enhanced magnetic resonance imaging and diffusion tensor imaging[J]. David A. Gutman;;Matthew Magnuson;;Waqas Majeed;;Orion P. Keifer;;Michael Davis;;Kerry J. Ressler;;Shella Keilholz.Brain Structure and Function,2013(2)

2.邵莉莉. 变应性鼻炎嗅觉障碍大鼠嗅感受神经元的实验研究[D].东南大学,2019.

3.嗅觉障碍大鼠锰增强磁共振成像研究[J]. 王亚玲;孙宝宾;臧凤超;常娣;吴迪;孙君君.中华耳鼻咽喉头颈外科杂志,2014(07)

4.变应性鼻炎引起嗅觉障碍的临床分析[J]. 顾东升;李佩忠.中国耳鼻咽喉颅底外科杂志,2014(01)

5.Olfactory dysfunction in seasonal and perennial allergic rhinitis[J]. Sven Becker;;Claus Pflugbeil;;Moritz Gröger;;Martin Canis;;Georg J. Ledderose;;Matthias F. Kramer.Acta Oto-Laryngologica,2012(7)

6.Effects of manganese injected into rat nostrils: implications for in vivo functional study of olfaction using MEMRI[J]. Benoist Lehallier;;Gérard Coureaud;;Yves Maurin;;Jean-Marie Bonny.Magnetic Resonance Imaging,2012(1)

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