经验分享--几种siRNA转染试剂：Lipo3000、RNAi MAX和RFect V2

随着基因工程和细胞生物学研究的不断发展，将siRNA导入真核细胞的转染技术，已成为研究基因功能、调控基因表达和突变分析等生物学试验的一种重要手段。目前，能够将siRNA导入细胞的方法主要有物理介导（电穿孔法、显微注射和基因枪）、化学介导（磷酸钙共沉淀法、载体转染等）以及生物介导（原生质体转染、病毒转染）三种途径。但由于物理介导法对细胞的伤害很大且需要借助特殊设备，而生物介导法的准备程序又比较复杂，并且常常对细胞类型有很强的选择性，因此，化学介导法成为实验室最常用的方法，其中又以载体转染法最为普遍。

市面上大多数的转染载体都是脂质体类载体，这类载体对细胞的毒性比较大，转染效果有时也不够理想。但随着纳米生物材料的发展，利用该种材料研发的转染载体不仅拥有极低的细胞毒性，在转染效率上也有非常不错的表现，以下是几种目前实验室最常用的siRNA转染试剂。

一、Lipofectamine 3000

Lipofectamine 3000是一款市场占有率和知名度都很高的转染试剂。该款产品采用了脂肪纳米微粒技术，它属于一种脂质体类的转染试剂。大家都知道Lipofectamine 2000原先是十分受欢迎的，但由于细胞毒性较为明显，其推广应用受到较大影响。Lipofectamine 3000较Lipofectamine 2000在成分上做了优化，细胞毒性和Lipofectamine 2000相比，要小了很多。尽管如此，Lipofectamine 3000对部分细胞还是存在较为明显的细胞毒性的。虽然其说明书表述该试剂对细胞作用温和、转染后非必需换液，但大多数科研者在分享转染经验时还是建议转染后6-8小时更换培养液，如果不及时更换新鲜的培养基，细胞死亡率还是比较高的，可达20-30%左右。不过，对于一些耐受性强的细胞，Lipofectamine 3000还是有比较不错的转染效率的。因而，研究者在选择使用Lipofectamine 3000时，需要考虑所要转染的细胞对脂质体的毒性是否耐受。

此外，使用Lipofectamine 3000进行转染复合物配制时，需要使用特殊培养基--Opti-MEM减血清培养基，来分别稀释转染试剂与小核酸进行配制。实验者需要额外购买这种减血清培养基。

二、Lipofectamine RNAi MAX

Lipofectamine RNAi MAX，是目前国际公认的最为权威的siRNA转染试剂之一。在赛默飞现售的所有转染试剂中，RNAi MAX的转染密度要求是最低的，细胞融合度在30-50%时就可以进行转染，而像Lipofectamine 2000/3000都要求融合度在70-90%之间转染。其实，要想知道一个转染试剂的毒性通过它的转染密度要求就能看出来，这也从侧面反应出，RNAi MAX的细胞毒性是更低的。

并且，相较Lipofectamine 3000，RNAi MAX做到了低siRNA浓度下就可获得优良的转染效果，转染性能又上了一个台阶。但是，实验者使用RNAi MAX转染试剂进行siRNA转染，转染后一般无需换液，但配制转染复合物时依旧需要额外购买Opti-MEM培养基。

作为这样一款高性能的siRNA转染试剂，RNAi MAX的售价自然不菲，其一支1.5mL规格的转染试剂，定价已逾万，这点对于很多经费有限的实验者来说往往需要考虑再三。

三、RFect V2 siRNA转染试剂

RFect V2 siRNA转染试剂是在RFect siRNA转染试剂基础上的升级产品，目前受到很多实验室的肯定。该试剂以新型可降解纳米材料为主要成分研发而成，区别于市场上的脂质体类转染试剂如Lipofectamine 3000、RNAi MAX。

升级后的RFect V2 siRNA转染试剂在各方面都有显著的提升。细胞毒性上，使用RFect V2 siRNA转染试剂在细胞融合度30-50%之间进行转染，转染后细胞死亡率只有5%左右，比RFect要更低，似乎还略优于RNAi MAX。转染效率上，Rfect V2 siRNA转染试剂盒里配置有专研的siRNA转染增强剂，能够有效降低细胞膜的免疫排异反应，从而提升siRNA转染的效率。实验数据显示，Rfect V2在很多贴壁细胞中的mRNA敲除效率可高达95%左右，比Rfect小核酸转染试剂要高出5-30%。我们将RFect V2和RNAi MAX分别转染小核酸NC-FAM到Hela细胞中，比较两个试剂的转染效率，结果发现，两者的转染效率皆达到了90%以上，难分伯仲。

另外，使用RFect V2 siRNA转染试剂不需要搭配如Opti-MEM这类特殊的培养基，其siRNA转染增强剂可完全替代无血清培养基配制转染复合物，转染效果更好。同时，血清对Rfect V2的转染效果也没有影响，也不必在转染4-6小时后换液，这些方面增加了实验的方便性，更有利于研究者使用。