「借来的」胰酶差点毁了细胞？快来看看你会不会犯这个错

组会前，平时嘻嘻哈哈的师弟，一大早就愁眉苦脸的找我诉苦：

师姐，我周末做了原代细胞，为了使细胞分离更快，效果更好，我特地问隔壁实验室多借了一点胰蛋白酶，并且消化时间延长了一些，结果，今天一早来看全部成片脱落了，马上要组会了，都不知道拿什么结果汇报！

师弟

师姐

你糊涂啊！细胞消化过度了呀！肿瘤组织原代细胞分离时，更适合使用胶原酶，而不是胰蛋白酶。 你先来复习一下不同的细胞或组织分离如何选择合适的消化酶，以获得更好的实验结果吧！

所以说，胶原酶能够特异性识别并水解胶原蛋白的酶，对细胞的损伤更小，不仅更适合心脏、骨、软骨、肿瘤组织、原代细胞以及一些难消化的细胞系，还在生物体的组织修复、细胞分离和组织工程等领域发挥着重要作用。

冷知识

胶原酶是一种能够特异性识别并水解胶原蛋白的酶，由多种微生物和不同的动物细胞产生[1]。最有效的胶原酶是由厌氧细菌溶组织梭状芽孢杆菌分泌的「粗制」胶原酶。Sigma-Aldrich® 是第一批商业化生产胶原酶的公司，我们最初采用的是 MacLennan、Mandl 和 Howes[2]所开发的 1953 年发酵和纯化工艺，但最终通过改进得到了更高活性的产品。「粗制」胶原酶是指该材料是由胶原酶及其他几种不同酶组成的混合物，这些酶可共同作用以分解组织。现已知存在有两种形式的胶原酶[3,4]。除少数例外，所有市售的不同胶原酶均是由溶组织梭状芽胞杆菌产生，或者是通过在大肠杆菌中表达克隆自溶组织梭状芽胞杆菌基因的重组形成而产生的。

不同类型的胶原酶（如 Ⅰ 型、Ⅱ 型等）可能针对不同的组织有特定的消化效果，胶原酶种类这么多，挑花眼怎么办？用胶原酶进行组织解离，效果不理想怎么办？如何选择一款适合自己的胶原酶呢？收藏这篇，手把手教你会用会挑！

1、日常生物学实验中，胶原酶主要用于以下两方面应用：

细胞分离：用于原代细胞制备，特别是当组织较硬或含有较多结缔组织时；

组织解离：用于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。

2、热门胶原酶类型及应用：

3、常见胶原酶问题及解决方案

*过度搅拌的剪切力会使 DNA 酶失活，添加的酶可能被胶原酶中存在的中性蛋白酶消化。

**使用 EGTA（或 EDTA）去除 Ca2+ 并冲走微生物，然后用缓冲液清洗组织以去除螯合剂。酶溶液中不要加入 EGTA 或 EDTA！

4、其他解离酶产品推荐：

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内容策划：潘成

内容审核：钟可可

题图来源：图虫创意

参考文献

[1]. Harper E. 1980. Collagenases. Annu. Rev. Biochem.. 49(1):10631078.

[2]. MacLennan JD, Mandl I, Howes EL. 1953. BACTERIAL DIGESTION OF COLLAGEN 1. J. Clin. Invest.. 32(12):1317-1322.

[3]. Bond MD, Van Wart HE. 1984. Characterization of the individual collagenases from Clostridium histolyticum. Biochemistry. 23(13):3085-3091.

[4]. Matsushita O, Jung C, Katayama S, Minami J, Takahashi Y, Okabe A. 1999. Gene Duplication and Multiplicity of Collagenases in Clostridium histolyticum. J. Bacteriol.. 181(3):923-933.

[5]. Fain JN. 1975. [53] Isolation of free brown and white fat cells.555-561.

[6]. Seglen PO. 1976. Chapter 4 Preparation of Isolated Rat Liver Cells.29-83.

[7]. Buitrago A, Gylfe E, Henriksson C, Pertoft H. 1977. Rapid isolation of pancreatic islets from collagenase digested pancreas by sedimentation through percoll? at unit gravity. Biochemical and Biophysical Research Communications. 79(3):823-828.

[8]. Bellemann P, Gebhardt R, Mecke D. 1977. An improved method for the isolation of hepatocytes from liver slices. Analytical Biochemistry. 81(2):408-415.

[9]. Ives HE, Schultz GS, Galardy RE, Jamieson JD. 1978. Preparation of functional smooth muscle cells from the rabbit aorta.. 148(5):1400-1413.

[10]. Fain JN, Loken SC. 1969. Response of Trypsin-treated Brown and White Fat Cells to Hormones. Journal of Biological Chemistry. 244(13):3500-3506.

[11]. Berry, M, Edwards, Aa, Barritt, G. 1991. Isolated Hepatocytes; Preparation, Properties and Applications. Elsevier.