PCR方法在侵袭性真菌病诊断中的价值

*仅供医学专业人士阅读参考

侵袭性真菌病核酸检测解决方案

一、侵袭性真菌病概述

侵袭性真菌病（invasive fungal diseases，IFD）是指真菌侵入人体（非寄生、过敏），在组织、器官或血液中生长、繁殖，并导致炎症反应及组织损伤的感染性疾病。常见的致病真菌包括念珠菌、曲霉、肺孢子菌、隐球菌和毛霉等。肺部是IFD最常见的感染部位，在侵袭性肺真菌病中，曲霉、耶氏肺孢子菌、新型隐球菌为常见致病菌。

随着医疗技术水平的提高，肿瘤化疗、器官移植等免疫低下患者增多，以及广谱抗生素、糖皮质激素和免疫抑制剂等药物的广泛应用，导致IFD发病人数持续增加，且病情多较危重，病死率高，严重威胁患者生命（表）。

表 真菌感染疾病负担[1]

二、IFD诊断难点

IFD诊断困难主要有以下几方面的因素：

1、该类疾病患者大多有基础疾病，这些疾病本身可发生肺部累及，若伴发肺部感染容易被原发病掩盖，且两者在临床表现上无特异性，故需在二者间进行鉴别，若无警惕性，易发生误诊、漏诊；

2、侵袭性肺部真菌病大多存在混合感染，给诊断带来较大的困扰；

3、虽然组织病理活检是诊断IFD的金标准，但IFD患者大多较危重，常合并呼吸衰竭、凝血功能障碍、多器官功能不全等情况，无法耐受有创检查，且该方法耗时相对较长，存在局限性；

4、传统的实验室检测方法，如涂片镜检、真菌培养、抗原/抗体等检测方法存在灵敏度低、培养周期长、部分病原体难培养、结果干扰因素多等诸多不足。此外，在结果判断上，需要兼顾宿主因素、区分定植、感染、污染、混合感染等多种因素来综合考虑，上述问题均为IFD临床诊断的难点；

5、IFD大多起病凶险，病死率高，故对检测手段的时效性要求较高，但目前传统的检测手段无法满足临床诊疗需求；

6、IFD治疗药物昂贵、周期长、副作用大等，因此对于IFD的诊断要求精准，防止误诊。

国内外指南、共识根据患者的宿主危险因素、临床特征、微生物学证据将IFD的诊断分为确诊、临床诊断和拟诊。进行分级诊断的意义在于提高临床医生对高危患者发生IFD的警惕性，强调尽早诊断、早期启动抗真菌治疗，降低IFD病死率。

三、PCR方法在IFD临床诊断中的价值

对于IFD的诊断，临床需要快速、精准的检测手段，因为它直接关系到患者的转归，在改善患者预后方面发挥重要作用，而从目前临床常用的检测方法来看，或有创操作，风险大；或周期长，敏感性、特异性差；或费用昂贵及结果解读困难等问题，无法满足临床需求，PCR方法在IFD的诊断中具有一定优势，其临床应用价值已经受到广泛关注。

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PCR方法在IFD诊断中的优势特点

PCR方法灵敏性、特异性高、检测周期短；受患者免疫状态及抗真菌药物影响因素少，此外，PCR方法可对真菌病原体载量进行检测，通过研究设定阈值来判断定植和感染，以及对患者预后进行评价。

图 通过设定PCR阈值可以辅助判断肺孢子菌的定植和感染[2]

图 PCR阳性阈值的设定能够辅助判断侵袭性肺曲霉病患者预后[3]

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国内外相关指南/共识对PCR的定位

欧洲癌症研究和治疗组织/侵袭性真菌感染协作组（ EORTC/MSGERC）侵袭性真菌病共识（2019）、美国胸科协会肺部及重症监护真菌感染实验室检测临床实践指南、血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌病的诊断标准与治疗原则（第六次修订版）、侵袭性真菌病实验室诊断方法临床应用专家共识、侵袭性真菌病真菌学检查指南、重症新型冠状病毒感染合并侵袭性肺曲霉病和肺毛霉病诊治专家共识等国内外指南 共识均肯定了PCR方法学价值，提出PCR方法具有较好的敏感度和特异性，可作为IFD诊断的重要微生物学证据，在IFD的诊断中有较好的应用 前景。

表 各指南/共识对于PCR方法的建议或表述

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PCR方法联合其它方法学检测的意义

当然，目前困扰临床医生的另一个主要问题，就是真菌定植与感染的鉴别，活检组织及无菌体液标本的检测结果可作为确诊依据，而非无菌体液的检测结果则需考虑定植感染的鉴别问题，故针对该问题的解决，更多的需要医生结合患者宿主因素及多种检测结果综合判断，在2017年 欧洲临床微生物学和感染病学会（ ESCMID ） - 欧洲医学真菌学联盟（ ECMM ） - 欧洲呼吸学会（ ERS ） 曲霉病诊断和管理指南、2019版EORTC/MSGERC侵袭性真菌病指南及其增刊中，均推荐PCR方法与G试验、GM试验联合检测，有助于区分定植和感染，显著提升IFD诊断的特异性 [10-12] 。

综述所述，PCR方法能够在IFD的早期诊断中发挥重要作用，其临床价值已逐步得到认可，具有广泛的应用前景，通过与多种检测方法的联合应用，可解决IFD的临床痛点，满足临床需求。

卓诚惠生侵袭性真菌病核酸检测解决方案

目前卓诚惠生侵袭性真菌病核酸检测解决方案可精准检出致病菌病原体，用于早期常见真菌菌属分型诊断、快速提供准确的检测报告、指导侵袭性真菌病精准治疗，满足临床侵袭性真菌检测的需求。

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曲霉菌属、新型隐球菌及耶氏肺孢子菌核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）

用于定性检测痰液样本中（ 如免疫低下或缺陷人群）的曲霉菌属、新型隐球菌和耶氏肺孢子菌的核酸，开启真菌精准检测新时代。

特点：

1.精准检出疑似致病真菌病原体

2.早期常见真菌菌属分型诊断

3.快速提供准确的检测报告

4 .助力 定植和致病菌区分

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曲霉菌属核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）

用于体外定性检测人痰液样本中的曲霉菌属的核酸DNA，用于曲霉菌属感染的辅助的诊断和管理。

特点：

1.聚焦肺真菌病主要致病菌

2.助力于肺曲霉病早期诊断

3.提供快速准确的检测报告

4.指导肺曲霉病精准治疗

关于卓诚惠生：

北京卓诚惠生生物科技股份有限公司成立于2010年，是专注于提供感染性疾病诊断整体解决方案的国家高新技术企业。公司基于多重PCR技术平台，开发了500余种诊断试剂，获得医疗器械注册证、备案证20余项。业务领域包括公共卫生、临床诊断、第三方实验室及家庭自测领域。卓诚惠生秉承“让诊断更有价值”的使命，致力于成为值得信赖的感染性疾病诊断专家型企业。

参考文献：

[1]Felix Bongo min, Sara Gago, Rita O Oladele, et al. Global and Multi-National Prevalence of Fungal Diseases-Estimate Precision. J Fungi (Basel). 2017,18;3(4):57.

[2]Cristina Veintimilla, Ana Álvarez-Uría, Pablo Martín-Rabadán, et al. Pneumocystis jirovecii Pneumonia Diagnostic Approach: Real-Life Experience in a Tertiary Centre. J Fungi (Basel). 2023 Mar 28;9(4):414.

[3]Hanne Lamberink, Alex Wagemakers, Kim C E Sigaloff, et al. The impact of the updated EORTC/MSG criteria on the classification of hematological patients with suspected invasive pulmonary aspergillosis. Clin Microbiol Infect. 2022,28(8):1120-1125.

[4]J Peter Donnelly, Sharon C Chen, Carol A Kauffman, et al. Revision and Update of the Consensus Definitions of Invasive Fungal Disease From the European Organization for Research and Treatment of Cancer and the Mycoses Study Group Education and Research Consortium. Clin Infect Dis. 2020,71(6):1367-1376.

[5]Chadi A Hage, Eva M Carmona, Oleg Epelbaum，et al. Microbiological Laboratory Testing in the Diagnosis of Fungal Infections in Pulmonary and Critical Care Practice. An Official American Thoracic Society Clinical Practice Guideline. Am J Respir Crit Care Med 2019,200(5):535-550.

[6]血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌病的诊断标准与治疗原则(第六次修订版). 中华内科杂志，2020,59(10):754-762.

[7]侵袭性真菌病实验室诊断方法临床应用专家共识. 中华内科杂志,2022,61(2):134-141.

[8]侵袭性真菌病真菌学检查指南. 中华检验医学杂志,2023,46(6):541-557.

[9]重症新型冠状病毒感染合并侵袭性肺曲霉病和肺毛霉病诊治专家共识. 中华结核和呼吸杂志, 2024,47(1):10-23.

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[11]Katrien Lagrou , Sharon Chen , Henry Masur, et al. Pneumocystis jirovecii Disease: Basis for the Revised EORTC/MSGERC Invasive Fungal Disease Definitions in Individuals Without Human Immunodeficiency Virus. Clin Infect Dis. 2021,72(Suppl 2):S114-S120.

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