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跑胶:一个神秘又常见的科研操作。从 PCR 到 WB,跑胶都是极为重要的一步。究竟怎么跑,胶才能又直又稳定呢?这篇经验图解一定能解决你的问题:
「进阶」
WB 跑胶常见问题
跑胶操作中, 还有 4 个关键步骤需额外注意:
不同蛋白对应不同浓度的胶
蛋白分子量不同,配置的浓缩胶、分离胶同步也不相同,以下三张表格带你速速配置匹配浓度的浓缩胶、分离胶,并匹配蛋白分子量。
装置有讲究
将胶专门的夹子夹住注意一定两面均要夹上且夹紧,将整个胶架放入电泳槽中,先加入 running buffer 电泳槽至夹脚上方一点即可,再向胶中加入 running buffer。不要急于加样,可以缓个几分钟看看是否漏液,漏的话需要重新用夹子固定胶。若不漏液,小心地将梳子拔下。
上样需谨慎
上样尽量选枪头细的枪,maker 最多上 10ul(条带就很深了),上蛋白样 10-20ul 均可(但其他孔道一定要保持一致,这样才能保证各个孔道的条带的平整),多出来的孔道要用上样缓冲稀释液来填充,不然最边上的条带会跑的歪向一边,条带会很丑。
跑胶参数设置
电压一般设置 110 V,其他也是可以的,一般 85~150 V 都问题不大,电压太大速度快但会产热大,电压太小速度太慢。胶跑到快出来不出来即可(可通过颜色来看)。
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