高致病性弧菌复杂多变，防不胜防？实战专家建议：改善虾体内外环境是重点

近日，华南地区连续遭遇几场大暴雨，对虾高致病性弧菌感染（俗称“玻璃苗”）频发。高致病弧菌究竟是什么菌？危害几何？如何防控？5月22日19:30，“寻找中国养虾致富带头人”栏目第44站又出发，广东省农科院基因中心微生物资源研究室副主任俞婷、广盈集团技术总监梁丽与大家一起探讨“高致病性弧菌感染”话题。

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弧菌复杂多变

根源在于基因组成

“与往年相比，今年对虾的高致病性弧菌感染检出率提高，致死率也更高。”梁丽介绍，高致病性弧菌并非某一种特定弧菌，而是能分泌毒力极强毒素的一类弧菌，单纯检测弧菌并不能严格鉴定。随后，俞婷分享了该弧菌的研究及检测方法研发。

近一年的水产病原检测统计数据显示，副溶血弧菌已经从早期的EMS综合征向高致病性副溶血弧菌转变。其中，检测次数最高的依次是EHP肝肠孢子虫、产毒副溶血弧菌和EMS早期综合征，阳性检出率依次是Vibrio弧菌、高敏感副溶血弧菌以及产毒副溶血弧菌。

“普通的细菌往往只有1条染色体，弧菌则有2条，基因组非常复杂。”俞婷介绍，复杂的基因组经过高频重组，给弧菌带来了复杂多变的特性。目前弧菌有91种，不同种类之间基因组也有着很大差异。具体来说，弧菌具有多达777个的毒力基因，占到整个基因组的20%。其中，毒素与内毒素相关基因有39个，这些基因会直接产生毒素，并导致某些病害的发生。

此外，弧菌基因组还包括4个抗生素抗性基因，根据作用机制将其分为3种：抗生素保护、改变抗生素靶点与抗生素外排。“在这类基因的作用下，常用的青霉素、头孢氨苄等抗生素不起作用”，俞婷建议，“大家可以转用氟苯尼考、诺氟沙星、氯霉素等抗生素进行杀菌。”

随后，俞婷为大家介绍了几种不同的基因鉴定方法。其中，tdh、trh、tlh等毒素基因用于鉴定弧菌是否有毒，gyrB、rpoB等保守基因用于弧菌的常规鉴定。“最重要的是pirA和pirB这两个毒力基因，它们是用来鉴定急性肝胰腺坏死病的。”俞婷介绍道，急性肝胰腺坏死病是由一类携带pirA和pirB毒力基因的细菌引起的对虾感染病，目前发现携带这两个毒力基因的病原菌有副溶血弧菌、坎贝氏弧菌、哈维氏弧菌。

对于基因检测的具体操作，俞婷提出以下注意事项。首先，就核酸提取方法而言，自动提取会比手动提取更具优势，能够达到“一次提取，多种核酸”，还会避免手动操作带来的误差。但是自动提取的问题在于需要同时提取多个样品，最少也要有16个。其次，就弧菌鉴定方法而言，qPCR探针法最为常用，具有特异性引物设计、灵敏度高、特异性强的特点。宏基因组二代测序（mNGS）方法则可以检测混合感染病原。

最后，俞婷就高致死性副溶血弧菌的感染特点、致病原因等分享了学界近几年的研究进展，并给大家简单介绍了自己所在的单位及团队。

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高致病性弧菌防治

关键在于改善内外环境

高致病性弧菌到底是什么？梁丽介绍：“高致病性弧菌并非某一种特定弧菌，而是能分泌毒力极强毒素的一类弧菌。在实际情况中，往往不能简单地将其与普通弧菌区分，必须借助基因鉴定。”

与普通弧菌相比，高致病性弧菌传染率、发病率、死亡率更高。这是因为其携带的TcA毒素基因的毒性相比前文提到的pirA和pirB更强，所产生的Tc毒素致病性高、致死性高，破坏力极强。

“普通弧菌一般会在对虾体表有伤口的情况下侵入，但高致病弧菌不需要这个前提条件。”梁丽介绍，高致病性弧菌主要通过分泌Tc毒素到肠道或者鳃丝内部，进入血细胞，破坏对虾免疫系统防线。一旦周围的介质ph值发生变化，高致病性弧菌就会自行打开外壳，利用TcA亚基刺穿对虾的细胞外壳来注入自己的毒性物质。

根据毒素特点，梁丽将高致病性弧菌的危害分为三种情况。其一，高致病性弧菌具备的溶细胞素特点会导致细胞溶解、死亡，组织坏死，出现“玻璃苗”现象。其二，肠毒素会破坏肠道上皮细胞，使肠功能紊乱，发生积水、拖便、红肠黄肠。其三，溶血毒素则会使对虾细胞发生溶血，肝胰脏功能衰竭，肝脏发黄、肿大或萎缩。“正常虾苗与患病虾苗有明显的体色区别。但由于肝肠孢子虫感染的病虾也会有体色发白现象，所以在养殖过程中，判断是否感染高致病性弧菌需要进一步的技术检验。”梁丽提醒道。

除此之外，实验数据显示，水体浓度在1.83×104CFU/mL的时候，不到两天的时间对虾死亡率就达到了75%。“这也再一次证明了高致病性弧菌相比普通弧菌具有更高的致死率。”梁丽强调。

而如何进行防控？一般来说，传统做法会外用泼洒蛭弧菌等消毒剂以及有益菌，同时搭配噬菌体、丁酸梭菌等护肝强体的制剂内服。“但将这套方法用在高致病性弧菌上往往出现防不胜防的情况。”梁丽解释，这是因为高致病性弧菌可以直接刺穿细胞膜注入毒素，并且具有较强的耐药性。

“防控高致病性弧菌 需要从内外环境两方面考虑。 ”梁丽介绍。 从外部环境来说，在养殖前一定要严检池塘底泥和水源，杜绝源头含菌。 “进水、换水一定要慎重。 因为一不小心就把外源带菌的水就带进来了，还有交叉感染的风险。 ”

改变弧菌生存环境更是防控的根本。“改变环境不是说让菌与菌直接竞争，而是说要通过环境来保持高致病性弧菌的过度应激状态，从而降低它的感染率与致死率。”梁丽解释道，水体的溶氧、Ph值以及底改都非常重要，养殖朋友一定要加强注意。

“另外，很多养殖朋友并不清楚水体的倒藻情况，监测Ph值十分必要。”梁丽建议大家每天在早上六七点与下午三点半左右这两个时间段进行Ph值监测。如果在同一时间点同一地方有超过0.5的明显降幅，则很有可能为高致病性弧菌的传播提供了条件。为此，梁丽分享了一个可行的解决方案：放苗30天内，下棚虾，2天用一次猎弧优，与有益菌交替使用。如果是外塘，分第一天第二天，5天一次，雨后、倒藻后及时解毒改底增氧，第二天第三天再使用。

“而对虾体内部环境来说，虾体的肠道与肝脏是重点。”梁丽提醒，养殖户往往有一个误区就是经常高剂量地喂丁酸等产酸的菌来提高虾体抵抗力，但这会破坏对虾肠道的酸碱平衡，效果适得其反。“丁酸等菌一定要间歇性投喂，其他时候可以选择非酸类的或者保肝护肝的有益菌。另外，一定要投喂优质饲料，降低难以降解、对肠道和肝胰脏有影响的原辅料的使用。”

最后，梁丽还强调需注意保持水体浓度。第一，要控制投喂量，一天只能投喂1次。同时要避免大量换水，做好管控，防止交叉感染。第二，要抑控弧菌繁殖。为此，可以采用傍晚使用底弧净优+氧无忧，白天使用“猎狐优”连用2天的方法，并补充有益菌。第三，对虾可以拌料内服促进毒素排出、修复肠粘膜、调节肠道功能紊乱以及增强体质的制剂，并结合抗菌制剂使用。

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作者：农财宝典-大国渔业实习生 邓霞。

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