新研究！在虾饲料加入这个，能够提高盐度冲击的耐受能力！

前言：

一项最新的研究表明，补充胆固醇（Chol）可增强低盐度条件下养殖白对虾的渗透压调节、抗氧化保护和免疫反应。

一、盐度对于养虾的影响

Na+/K+是参与渗透压调节最重要的渗透压调节蛋白之一，负责维持离子平衡（如：Na+和K+）和细胞内外的膜电位细胞ATPase (NKA) 。许多研究已经证实，盐度变化，特别是外部环境盐度的降低，伴随着水生动物NKA活性的增加（Chen等，2022年）。NKA被激活，可以吸收从外部环境的Na+，以对抗无机离子的被动损失 (Jasmani et al., 2010)。

胆固醇（Chol）是生物体维持细胞膜存在、生长和结构的必需营养素，是蜕壳激素的前体框架。与脊椎动物不同，甲壳类动物不能自行合成Chol，而是完全依赖外源性食物摄入来满足生理过程的需要 (Goad, 1981)。实验报告称，NKA的结构和活性高度依赖于质膜中的Chol水平（Garcia 等人，2019）。

先前的研究表明，饲料中适当水平的胆固醇有助于促进虾的蜕壳、脂质转运、非特异性免疫、肠道微生物群和低温耐受性（Su et al., 2022）。然而，饲料中胆固醇能否促进对虾的渗透和盐胁迫耐受性尚不清楚。

二、研究方法

1、以20.5%的鱼粉和0.2%的鱼油为原料，配制不同剂量Chol的饲料，得到6种实验饲料：0.05%Chol的基础饲料，Chol的配方等级为0.10%、0.14%、0.18%、0.22%、0.26%和0.30%，分别命名为 Chol 1.0、Chol 1.4、Chol 1.8、Chol 2.2、Chol 2.6 和 Chol 3.0，实验饲料组成见表1。

2、南美白对虾在试验前，虾在水泥罐（3.0mx2.0mx1.0m，6000 L）中驯化，并用商业饲料（40%蛋白质）喂养14天。14天的水温、盐度、溶解氧和pH值分别为26.6-27.5℃、31‰、DO≥5.8mg/L和8.0-8。然后，将所有虾（初始重量1.27±0.18g）以60尾虾/罐的密度，随机放养到36个实验塑料罐（400L/罐）中，一共6组，一组共有6个塑料罐，每组虾以5%–7%的体重喂食3次/天，每周随机抽样以检查虾的平均体重。

3、投喂8周后，对所有虾进行生长测试，然后添加淡水，使盐度从31‰突然降低到11‰（盐度胁迫实验）。实验持续了144小时。在24、72和144小时对虾进行随机取样检查。

表1：实验组中成分的组成

三、研究成果

1、存活率和增长率

Chol 1.0组的存活率最低 (81.67%±5.68%)（表2），生长性能随着饲料Chol水平的增加而提高，Chol 2.2、Chol 2.6和Chol 3.0组之间无显著差异，投喂Chol 1.0组虾的FCR显著高于投喂Chol1.8-3.0组的虾。同时，Chol 3.0组的肝胰指数最高。

表2.：虾饲料中添加胆固醇，对南美白对虾的生长性能影响

2、血浆生化参数

投喂8周后，饲料中添加Chol显著影响对虾血浆生化参数（表3）。与投喂Chol 1.0和Chol 1.4的虾相比，投喂Chol 2.6和Chol 3.0的虾血浆TC、HDL-C和LDL-C浓度显着增加，Chol 1.8-3.0组的TG水平显著高于Chol 1.0组。

表3：添加不同胆固醇饲料，对血浆生化参数的影响

3、渗透压和NKA活性

8周后（图1），Chol 1.0组的血浆渗透压明显高于Chol 1.8-3.0组，Chol 1.0组的NKA活性明显低于Chol 3.0组。盐度胁迫后，渗透压在24小时后显著下降，并在72小时后在所有组中稳定下来。此外，与投喂Chol 1.0和Chol 1.4的虾相比，饲喂Chol 2.6和Chol 3.0的虾，在盐胁迫后NKA活性显着增加。

图1：虾饲料添加胆固醇对渗透压和NKA活性。

4、抗氧化指数

根据图2，喂养8周后，Chol 2.6和Chol 3.0组的T-AOC和SOD活性分别最高，显著高于Chol 1.0-1.4组。盐度胁迫72小时后，Chol 1.0~1.4组T-AOC和GSH水平显著降低，Chol 2.2~3.0组SOD活性显著升高。SOD和T-AOC随着胆固醇摄入量的增加而增加，表明胆固醇在合适的盐度条件下增强了虾的抗氧化防御系统。盐胁迫后，高Chol组（Chol 2.2、Chol 2.6 和 Chol 3.0）T-AOC 先升高，144h后逐渐恢复到胁迫前水平，而低Chol组（Chol 1.0、Chol 1.4）T-AOC 持续下降和，同时，SOD活性仅在高Chol组中显着增加。

抗氧化系统（T-AOC和SOD）的结果表明，Chol通过抗氧化系统帮助虾吸收ROS，增强对突然盐度下降的抵抗力。同时，仅在低Chol组中观察到GSH含量降低，这表明饲料Chol可防止虾因盐度引起的应激引起的GSH耗竭。Chol通过激活酶促和非酶促抗氧化防御系统的综合作用，共同增强了白对虾的耐盐性。

图2：饲料添加胆固醇，对虾肝胰腺抗氧化指标的影响。

5、免疫反应

8周后（图3），Chol 2.6组的THC和PA，以及Chol 2.2组显著高于Chol 1.0组，与投喂Chol 1.0的虾相比，Chol 2.6组Toll和Dorsal的表达显着升高，TNF-α显着降低。本研究表明，Chol 2.6组虾的THC、PA和Toll表达均增加，证实补充Chol可增强细胞免疫和体液免疫。

图3.：盐度胁迫前后，饲料胆固醇对南美白对虾非特异性免疫力影响的热图。

四、研究观点

综上所述，在饲料中添加2.2g/kg的胆固醇（Chol）可以满足白对虾的生长需要，2.6~3.0 g/kg的Chol可以提高对盐度冲击的耐受能力。此外，饲料中添加2.6-3.0 g/kg的Chol可提高酶促抗氧化能力，有效降低盐度诱导的大分子损伤。总之，这项研究强调了Chol作为一种必需营养素，对提高虾的抗压能力。