乙肝新型化合物TL020，CADA类似物，评价抗HBV活性及

美国内华达大学里诺分校生物化学与分子生物学系研究人员在HEPDART2021大会上，介绍了一项在研乙肝新机制化合物——TL020的研究进展，研究主要目的是评价了TL020的抗HBV活性及其对宿主蛋白表达的影响。

乙肝新型化合物TL020，CADA类似物，评价抗HBV活性及对蛋白质影响

一、研究背景

研究人员认为，目前针对乙肝病毒的药物还无法达到预期的治疗终点，预计在未来几年中，组合疗法在改善慢乙肝患者预后方向将发挥重要作用。因此，开发出具有新作用机制的抗病毒药物将是有希望的先导药物。例如，环三氮杂二磺酰胺(CADA)及其类似物已显示出对多种病毒的活性。

在体外筛选当中，CADA类似物TL020已经显示出有效抑制HBV复制的能力，且对细胞活力的影响最小。CADA，已证明其降低水平的能力通过以信号肽依赖性方式干扰特定蛋白质的共翻译易位。这种干扰机制，能够导致蛋白质的定位错误和降解。在本研究中，评估了CADA类似物TL020及其对蛋白质合成的影响，以阐明其抗HBV活性的机制。

二、研究方法

采用不同浓度的TL020处理表达HBV病毒粒子的HepG2.2.15细胞4天，然后使用Southernblot技术检测量化HBVDNA的水平。中性红吸收被用来量化毒性。使用20μM的TL020处理HepG2细胞48小时，确定其对细胞蛋白质水平的影响。细胞在RIPA缓冲液中裂解，细胞碎片通过离心分离。使用胰酶消化蛋白质，并通过LC-MS/MS进行分析。或者在裂解后，用离心柱分离RNA并反转录为cDNA。使用SYBRGreen染料，进行qPCR检测来确定转录水平。

三、研究结果

结果表明，在最初的筛选中，TL020在降低HBVDNA水平方面非常有效。将HBVDNA水平降低50%(EC50)或90%(EC90)所需的浓度分别测定细胞内和排出的病毒粒子。对于排出的病毒粒子的EC50在0.49~0.63μM之间，EC90在1.2~1.6μM之间。对于细胞内HBVDNA，EC50为1.2μM,EC90为5.9μM。

这些值远低于将细胞活力降低50%(CC50)所需的浓度，该浓度介于38至53μM之间。使用LC-MS/MS观察TL020对HepG2细胞的影响，结果揭示了在检测到的4680个蛋白质中，有385个基因的蛋白质水平存在显著差异。通路分析显示，ECM受体相互作用、内质网中的蛋白质加工、胆汁分泌、丙酮酸代谢和代谢通路受到最显著的影响。

在考虑干扰共翻译易位的机制时，有30种蛋白质的子集被下调，并包含共翻译易位所需的信号肽。通过qRT-PCR分析，发现了18种蛋白质，其mRNA水平要么稳定要么升高，表明其具有转录后机制。

四、研究结论

综上所述，在这项TL020对宿主蛋白表达影响的研究表明，这种类似物的特异性可能不如CADA。大多数下调的蛋白质列表被富含信号肽的蛋白质。有必要进行后续研究，以确定所提出的机制直接靶向哪些蛋白质，并确定哪些蛋白质影响HBV复制。本研究中的介绍工作，对于进一步研究蛋白质的优先排序很有用。

五、核心观点梳理

小番健康结语：我们简单梳理一下，研究人员的核心观点。现有慢乙肝疗法还无法实现较高的功能性治愈率（包括核苷类似物或干扰素），未来采用联合用药将在改善慢乙肝进程方面起着重要作用。全球正有许多新机制候选药物进入乙肝的临床研究中，其中，观察到环三氮二磺酰胺(CADA)及其类似物在抗多种病毒方面具有活性。

体外研究中，CADA类似物TL020已被证明能有效抑制乙肝病毒复制，并对细胞活力影响最小。CADA的作用机理主要表现在干扰特定蛋白质的的共翻译易位，这种干扰机制表现出开发新药物的潜力，在本研究中，研究人员主要评估了CADA类似物TL020和它对蛋白质表达的影响，评估的结果有助于阐明抗疫啊功能病毒活性的机制。