撰文 | 唐小糖
此前瑞士团队曾在bioRxiv上上传了一篇类似的反向遗传学快速合成SARS-CoV-2的研究，由于部分媒体误读导致了一定的恐慌。其实反向遗传学合成方法是当前生物学领域重要的关键工具之一，它可以促进病毒检测和治疗的发展，可以不受病毒来源的限制，短时间内合成或改造病毒，包括增加标签或荧光等。
2020年4月4日，德州大学医学院在Cell Host&Microbe上在线发表了一篇题为An infectious cDNA clone of SARS-CoV-2的文章，该研究使用反向遗传学技术将SARS-CoV-2基因组的七个cDNA片段合成了全基因组cDNA。转录后的RNA在具有高度感染性，电穿孔进入细胞后产生2.9×106PFU/ml病毒。与临床分离的病毒株相比，该合成克隆衍生的SARS-CoV-2（icSARS-CoV-2）表现出类似的噬菌斑形态、RNA图谱以及复制动力学。重要的是，icSARS-CoV-2除了保留合成工程的标记外并并没有获得其他突变。合成标记是在基因组ORF7中引入报告基因，生成mNeonGreen SARS-CoV-2（ICSARS-CoV-2mNG）。icSARSCoV-2mNG可用于评估干扰素的抗病毒活性。
全长SARS-CoV-2的cDNA感染克隆的合成
本研究的icSARSCoV-2mNG即在ORF7中增加了荧光报告系统，可以通过荧光来观察病毒复制，与普通的噬斑实验或TCID50定量相比，荧光读取的的实验周期大大缩短，此外，荧光读取的定量方法还显著减少了工作量，还可用于基于mNG病毒检测的高通量自动化筛选。本研究也提供了一定的证据，在经过I型干扰素治疗后，荧光报告病毒仍然能以快速高效的方式行使功能。此外，mNG报告病毒的荧光标记很稳定，可以用来进行长期和体内研究。
mNeonGreen病毒的稳定性及应用
最重要的是，该手段可以构建突变株来研究其复制或感染过程中的功能，如删除SARS-CoV-2中的S蛋白来研究其功能变化带来的影响，以及评估S蛋白的受体结合域中的点突变和其与ACE2受体的亲和力的关系等。此外，还可以通过改变病毒序列来构建动物模型，使其发展成为可以感染小鼠的小鼠适应株，为疫苗和药物的研究提供了巨大便利。
总而言之，该研究利用反向遗传学合成了SARS-CoV-2，该icSARS-CoV-2可用以研究病毒的复制以及发病机制，此外，研究者还建立mNG荧光报告的icSARS-CoV-2，可以帮助高通量筛选药物，为COVID-19的研究和治疗提供了一定的策略。
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