何启盖：从敏感、特异和稳定性来评价诊断试剂盒

在第27届广东畜牧兽医科技大会上，华中农业大学动物医学院教授何启盖分享《猪病诊断技术的应用及正确解读》主题报告。...

《农财宝典》新牧网记者 陈有柏
在疫病愈加复杂的时期，无论是对于疾病的防控还是治疗，诊断都是一个不可缺少的流程。在第27届广东畜牧兽医科技大会上，华中农业大学动物医学院教授何启盖分享《猪病诊断技术的应用及正确解读》主题报告。

华中农业大学动物医学院教授何启盖
何启盖指出，完整的猪病诊断流程首先是临床观察与流行病学调查，提出假设的病因；然后，通过实验室检测抗体和病原，进一步验证假设；最后是确诊，可以进行：病例复制（科赫法则）; 结合临床症状和病理学分析；治疗性诊断（一定要结合药敏试验）。

第27届广东畜牧兽医科技大会现场
可通过病理、血清和病原学诊断检测
对于常用的诊断技术，何启盖介绍，一是现场流行病学调查与诊断技术，包括：1、病例对照研究；2、队列研究；3、类症鉴别诊断：根据疾病之间不同的流行病学特征（发病季节发病日龄）、临床症状、病理变化的差异，采用排除法；4、设计调查表。
二是实验室诊断技术，分为病理学、血清学和病原学诊断检测技术。病理学诊断技术有病理切片 HE 染色：通过常规切片和冰冻切片等两种方式制备切片；以及分析病变特征（水泡变性、充血出血、梗死等）。前者用于病变观察，后者用于荧光抗体染色等快速诊断。以及免疫组化技术：病原（抗原）在组织中的分布。优质抗体和去除内源性酶的干扰是关键。
病原学检测可进行病原分离鉴定，包括：1、细菌分离（厌氧、需氧菌、难培养的细菌；抗生素或营养缺陷型选择性培养基）；2、病毒分离鉴定：有病变和无病变的病毒；不同毒株适应不同细胞； 3、其他分离方法：鸡胚尿囊腔（或卵黄囊、绒毛尿囊膜）接种分离；4、实验动物接种：家兔、小鼠等。

参会嘉宾听课很认真
靶基因的保守性会影响 PCR 诊断敏感度
在使用试剂盒进行诊断时，何启盖指出，可以通过以下方面来评价，比如敏感性：从目标群体中检出感染动物（≠发病动物）；特异性：区分感染和非感染动物；稳定性：批间变异系数低于 10%。
有些因素会影响到诊断方法的的敏感度，比如抗体检测 ELISA是靶蛋白的保守性、纯度；抗原检测 ELISA是捕获抗体和检测抗体的亲和力；PCR是靶基因的保守性；以及上述方法的检测程序的优化。与稳定性有关的因素是抗原和试剂的稳定性。
了解诊断的要领后，还需正确应用与分析诊断结果，何启盖指出，诊断方法的组合有串联或并联（平行）试验，是指两种或两种以上的诊断方法的配合应用和诊断结果的采用方式。串联试验能提高诊断的特异性；平行试验能提高诊断的敏感性。具体选择哪种试验，可根据疾病的造成损失的严重程度而定。
诊断技术前景广阔，应用将更简便
疫病的繁杂也促进了诊断方法的升级，对于发展趋势，何启盖认为会更加快速、简便、可现场使用；可视化、定量化，与免疫评估相关；以及高通量。他介绍了建立 IFN-γ-ELISpot 方法来评价猪伪狂犬病疫苗免疫效果。通过PRV IFN-γ-ELISpot 方法与抗体检测、攻毒保护结合，评价伪狂犬疫苗免疫程序。结果证明，弱毒疫苗与灭活疫苗组合，能产生高水平的体液免疫和细胞免疫，提供最强的保护力。
何启盖现场还展示了一个案例来说明诊断技术的应用：某规模化猪场新的案例发病情况：140 日龄；20多头达到40.5C以上。对于诊断的流程，何启盖表示，先进行发病日龄调查，发现是生长育肥猪多发，而且急性死亡，口鼻流血，肺脏粘连。
然后再进行细菌鉴定，使用ApxIV-PCR + ApxI/II/III-PCR 的方法，确定强弱毒和血清。他指出，ApxIV-ELISA 鉴别诊断试剂盒能区分灭活疫苗免疫猪与自然感染猪；区分 ApxIV 基因缺失活疫苗、亚单位疫苗与野毒感染猪；是启动猪传染性胸膜肺炎的净化方法（加拿大种猪是传染性胸膜肺炎阴性）。
经过一系列的诊断，何启盖给出的处置是发病群体饮水给药；未发病或受威胁群体进行血清特异性疫苗免疫；并消除可能的诱因，如温度与通风。
本届大会主 办单 位：
广东省畜牧兽医学会
承办单位：
南方农村报、农财宝典、新牧网，
中牧集团，
人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室。
铂金赞助单位：
默沙东动物保健品（上海）有限公司、
广州市华南农大生物药品有限公司、
金河生物科技股份有限公司；
晚宴一等奖赞助：
鹤山市墟岗黄畜牧有限公司；
金牌赞助单位：
佛山市正典生物技术有限公司、
广州悦洋生物技术有限公司、
成都微瑞生物科技有限公司、
深圳市绿诗源生物技术有限公司、
罗氏诊断产品（上海）有限公司、
广东旺大集团股份有限公司、
帝肯（上海）贸易有限公司、
广东省动物防疫物资储备中心、
勃林格殷格翰中国动物保健、
广东永顺生物制药股份有限公司、
广州维伯鑫生物科技有限公司；
晚宴特别鸣谢：
广东温氏大华农生物科技有限公司
白酒赞助：
广东永顺生物制药股份有限公司；
红酒赞助:
四川华神兽用生物制品有限公司。

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